埃博拉病毒糖蛋白與病毒黏附、入侵宿主細(xì)胞等過程密切相關(guān),為了更好地研究該糖蛋白與宿主細(xì)胞的相互作用,擬通過哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng),構(gòu)建GP1亞基Fc標(biāo)簽融合蛋白。經(jīng)鑒定,成功構(gòu)建了埃博拉病毒糖蛋白GP1亞基的真核表達(dá)載體pFUSE-GP1-hIgG1-Fc2,并利用該載體及293T細(xì)胞構(gòu)建了表達(dá)GP1亞基融合蛋白的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。該融合蛋白N端帶有IL2分泌信號(hào)肽,C端帶有人IgG1-Fc2標(biāo)簽,可在293T細(xì)胞以分泌表達(dá)的方式存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清中,而后利用Protein A親和層析進(jìn)行融合蛋白純化。經(jīng)Western Blots鑒定,成功制備GP1-Fc融合蛋白。這不僅為埃博拉病毒糖蛋白的研究提供了技術(shù)支撐,也為其他種類蛋白的哺乳動(dòng)物細(xì)胞真核表達(dá)純化提供了新思路。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 蛋白質(zhì)序列分析
    1.3 GP1片段選取及引物設(shè)計(jì)
    1.4 GP1片段的擴(kuò)增與連接
    1.5 重組質(zhì)粒陽性克隆菌落鑒定及重組質(zhì)粒擴(kuò)增
    1.6 Zeocin篩選與維持濃度的確定
    1.7 Zeocin轉(zhuǎn)染后表達(dá)細(xì)胞的篩選
    1.8 細(xì)胞系的擴(kuò)增及蛋白表達(dá)純化
    1.9 目的蛋白的鑒定
2 結(jié)果與分析
    2.1 利用ExPASy 對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行序列分析和性質(zhì)分析
    2.2 質(zhì)粒pFUSE-GP1-hIgG1-Fc2的構(gòu)建
    2.3 表達(dá)GP1-Fc蛋白細(xì)胞系的構(gòu)建
    2.4 Protein A親和層析純化
3 討 論



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