建立了簡易可行的測定綠膿桿菌對藥物外膜通透性的方法，在此基礎(chǔ)上，對臨床分離的耐β—內(nèi)酰胺抗生素(至少耐一種β—內(nèi)酰胺抗生素)的綠膿桿菌測定了對頭孢唑啉及泰能的外膜通透性。通過對綠膿桿菌臨床分離株的誘變，采用泰能濃度梯度平皿篩選與液體篩選相結(jié)合得到泰能耐藥菌株715／R₁、715／R₂，對其測定了對泰能的外膜通透性，并對其膜蛋白進行了SDS-PAGE分析，表明其耐藥性與外膜蛋白缺失引起的外膜通透率降低有一定相關(guān)性。進一步利用PCR技術(shù)克隆了該外膜蛋白基因，并在大腸桿菌中成功地得到表達；該基因可使泰能耐藥菌株恢復(fù)敏感性。利用原株與誘變株為指示菌，建立了以綠膿桿菌外膜通透性為靶點的微生物來源的抗菌物質(zhì)篩選方法。 根據(jù)單位菌體在一定時間內(nèi)吸收抗生素的量，測定耐藥菌株的外膜通透性�？股氐亩繙y定采用杯碟法。首先制作所測抗生素的生物檢定標準曲線，由抑菌圈直經(jīng)可從標準曲線上計算出相應(yīng)抗生素的量，以細菌細胞對抗生素的吸收率代表通透率。根據(jù)所建立方法我們對臨床分離的101株綠膿桿菌測定了對頭孢唑啉的外膜通透性；對其中32株測定了對泰能的外膜通透性；并...

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
文獻綜述 綠膿桿菌的外膜通透性及其外排系統(tǒng)在耐藥性中的作用
    一、外膜通透性中孔道蛋白的作用
        1 綠膿桿菌的外膜蛋白
        2 綠膿桿菌外膜對親水性物質(zhì)的通透：
            (1) OprF的作用
            (2) 選擇性通道
        3 綠膿桿菌對疏水性化合物的通透性
        4 外膜通透性的檢測
        5 改變綠膿桿菌外膜通透性的物質(zhì)
    二、綠膿桿菌的耐藥性
        1 固有耐藥性
        2 外膜屏障作用——即外膜通透性降低引起的細菌耐藥性
        3 外膜通透性改變與其它耐藥機理的協(xié)同作用
    三、主動外排系統(tǒng)在多重抗生素耐藥性中的作用
        1 主動外排泵系多重耐藥性形成的主要原因
        2 主動外排機制的研究方法
        3 綠膿桿菌的多重耐藥性主動外排系統(tǒng)
    四、耐藥性研究在治療綠膿桿菌感染中的意義以及存在問題
論文工作 綠膿桿菌外膜蛋白與耐藥性關(guān)系及其基因的克隆與應(yīng)用研究
    中文摘要
    前言
    第一部分 綠膿桿菌臨床分離株外膜通透性的測定
        實驗材料
        實驗方法
        實驗結(jié)果與討論
    第二部分 綠膿桿菌臨床分離株中外膜蛋白與耐藥性的關(guān)系研究
        實驗材料
        實驗方法
        實驗結(jié)果與討論
            一、耐藥菌株的誘變與篩選
            二、SDS-PAGE檢測膜蛋白
    第三部分 綠膿桿菌中外膜蛋白基因的克隆及表達
        實驗材料
        實驗方法
        實驗結(jié)果與討論
            一、外膜蛋白(OprD₂)基因的體外擴增
            二、OprD₂基因表達質(zhì)粒的構(gòu)建
            三、OprD₂基因的誘導(dǎo)表達
            四、綠膿桿菌715／R₁中OprD₂的轉(zhuǎn)染
        討論
    第四部分 以綠膿桿菌外膜蛋白OprD₂為靶點的抗菌活性物質(zhì)篩選方法的建立
        實驗材料
        實驗方法
        實驗結(jié)果與討論
            一、綠膿桿菌715號菌株與715／R₁對一些已知抗生素的敏感性檢測
            二、微生物來源的抗菌物質(zhì)的篩選
結(jié)論
參考文獻
ABSTRACT
致謝



本文編號：3848358