目的:分離并鑒定人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSC)分泌的外泌體,研究其對(duì)人血的溶血性能。方法:通過超速離心法從臍帶干細(xì)胞培養(yǎng)上清中分離外泌體,采用蛋白免疫印跡法、透射電鏡和納米顆粒跟蹤分析法進(jìn)行鑒定;制備人紅細(xì)胞懸液,加入不同濃度外泌體,進(jìn)行溶血試驗(yàn),用試管法觀察并用紫外分光光度法測定計(jì)算溶血度。結(jié)果:分離獲得的外泌體特異富集蛋白CD9、CD81、Alix,不含有高爾基體蛋白Gm130;透射電鏡下可見其呈杯盤狀結(jié)構(gòu),粒徑直徑為40～120 nm;臍帶干細(xì)胞外泌體對(duì)人血的溶血率小于5%。結(jié)論:HUCMSC分泌的外泌體具有外泌體的經(jīng)典結(jié)構(gòu)及典型特征,不引起人血溶血反應(yīng),為未來臍帶干細(xì)胞外泌體作為載體進(jìn)行藥物遞送提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 HUCMSC的分離培養(yǎng)
        1.2.2 HUCMSC的誘導(dǎo)分化
        1.2.3 HUCMSC的流式細(xì)胞學(xué)檢測
        1.2.4 去外泌體胎牛血清的制備
        1.2.5 臍帶干細(xì)胞外泌體的提取
        1.2.6 外泌體蛋白的檢測
        1.2.7 外泌體納米粒徑的檢測
        1.2.8 透射電鏡檢測外泌體形態(tài)
        1.2.9 人紅細(xì)胞生理鹽水懸液的制備
        1.2.1 0 常規(guī)體外溶血實(shí)驗(yàn)
        1.2.1 1 紫外分光光度法檢測溶血情況
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 HUCMSC的形態(tài)學(xué)特征
    2.2 HUCMSC的多向誘導(dǎo)分化
    2.3 HUCMSC表面標(biāo)志的鑒定
    2.4 HUCMSC外泌體的鑒定
    2.5 HUCMSC體外溶血試驗(yàn)觀察
    2.6 HUCMSC溶血試驗(yàn)吸光度比較及溶血率計(jì)算
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