目的研究小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)特異性干擾EgTPx基因表達后對細粒棘球蚴(Echi-nococcus granulosus,Eg)原頭節(jié)DNA氧化損傷機制的影響。方法利用電穿孔法將EgTPx-siRNA干擾序列轉(zhuǎn)染細粒棘球蚴原頭節(jié),實驗分為EgTPx-siRNA-60、115、250干擾組,陰性對照組和空白對照組。電轉(zhuǎn)3d后,協(xié)同自然狀態(tài)下原頭節(jié)體外耐受H₂O₂最大濃度干預1h,綜合伊紅拒染試驗和堿性磷酸酶檢測干擾前后原頭節(jié)活性變化及qRT-PCR檢測干擾前后EgTPx-mRNA表達水平變化篩選最佳EgTPx-siRNA干擾序列。采用單細胞凝膠電泳法(彗星試驗)檢測干擾前后原頭節(jié)DNA氧化損傷程度變化;采用試劑盒法檢測原頭節(jié)體內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,分析siRNA干擾對DNA氧化損傷機制的影響。結(jié)果自然狀態(tài)下細粒棘球蚴原頭節(jié)體外耐受H₂O₂的最大濃度為0.4mmol/L,干預時間為1h;電穿孔法將綠色熒光...

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【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        1.1 細粒棘球蚴原頭節(jié)
        1.2 試劑
        1.3 儀器
    2 方法
        2.1 EgTPx基因siRNA干擾序列的設(shè)計與合成
        2.2 細粒棘球蚴原頭節(jié)體外耐受H2O2最大濃度的確定
        2.3 EgTPx-siRNA干擾序列的篩選
            2.3.1 siRNA干擾EgTPx基因的表達
            2.3.2 轉(zhuǎn)染效率分析
            2.3.3 細粒棘球蚴原頭節(jié)活性檢測
            2.3.4 細粒棘球蚴原頭節(jié)EgTPx-mRNA表達水平檢測
        2.4 細粒棘球蚴原頭節(jié)DNA氧化損傷情況檢測
        2.5 細粒棘球蚴原頭節(jié)體內(nèi)ROS含量檢測
        2.6 統(tǒng)計學分析
結(jié)果
    1細粒棘球蚴原頭節(jié)體外耐受H2O2最大濃度的確定
    2最佳EgTPx-siRNA干擾序列的篩選
        2.1 EgTPx-siRNA電穿孔轉(zhuǎn)染效率
        2.2干擾EgTPx基因表達對細粒棘球蚴原頭節(jié)活性的影響
            2.2.1細粒棘球蚴原頭節(jié)存活率
            2.2.2堿性磷酸酶活性
        2.3干擾EgTPx基因表達后細粒棘球蚴原頭節(jié)EgTPx-mRNA水平變化
    3 干擾EgTPx基因表達后細粒棘球蚴原頭節(jié)DNA損傷程度變化
    4 干擾EgTPx基因表達后細粒棘球蚴原頭節(jié)體內(nèi)ROS含量檢測
討論



本文編號：3822451