目的研究小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)特異性干擾EgTPx基因表達(dá)后對(duì)細(xì)粒棘球蚴(Echi-nococcus granulosus,Eg)原頭節(jié)DNA氧化損傷機(jī)制的影響。方法利用電穿孔法將EgTPx-siRNA干擾序列轉(zhuǎn)染細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié),實(shí)驗(yàn)分為EgTPx-siRNA-60、115、250干擾組,陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組。電轉(zhuǎn)3d后,協(xié)同自然狀態(tài)下原頭節(jié)體外耐受H₂O₂最大濃度干預(yù)1h,綜合伊紅拒染試驗(yàn)和堿性磷酸酶檢測(cè)干擾前后原頭節(jié)活性變化及qRT-PCR檢測(cè)干擾前后EgTPx-mRNA表達(dá)水平變化篩選最佳EgTPx-siRNA干擾序列。采用單細(xì)胞凝膠電泳法(彗星試驗(yàn))檢測(cè)干擾前后原頭節(jié)DNA氧化損傷程度變化;采用試劑盒法檢測(cè)原頭節(jié)體內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,分析siRNA干擾對(duì)DNA氧化損傷機(jī)制的影響。結(jié)果自然狀態(tài)下細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)體外耐受H₂O₂的最大濃度為0.4mmol/L,干預(yù)時(shí)間為1h;電穿孔法將綠色熒光...

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        1.1 細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)
        1.2 試劑
        1.3 儀器
    2 方法
        2.1 EgTPx基因siRNA干擾序列的設(shè)計(jì)與合成
        2.2 細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)體外耐受H2O2最大濃度的確定
        2.3 EgTPx-siRNA干擾序列的篩選
            2.3.1 siRNA干擾EgTPx基因的表達(dá)
            2.3.2 轉(zhuǎn)染效率分析
            2.3.3 細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)活性檢測(cè)
            2.3.4 細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)EgTPx-mRNA表達(dá)水平檢測(cè)
        2.4 細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)DNA氧化損傷情況檢測(cè)
        2.5 細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)體內(nèi)ROS含量檢測(cè)
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    1細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)體外耐受H2O2最大濃度的確定
    2最佳EgTPx-siRNA干擾序列的篩選
        2.1 EgTPx-siRNA電穿孔轉(zhuǎn)染效率
        2.2干擾EgTPx基因表達(dá)對(duì)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)活性的影響
            2.2.1細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)存活率
            2.2.2堿性磷酸酶活性
        2.3干擾EgTPx基因表達(dá)后細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)EgTPx-mRNA水平變化
    3 干擾EgTPx基因表達(dá)后細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)DNA損傷程度變化
    4 干擾EgTPx基因表達(dá)后細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)體內(nèi)ROS含量檢測(cè)
討論



本文編號(hào)：3822451