本工作從整體、組織、細胞、分子水平對PASMC在肺血管結構重建中的變化特點、作用及其發(fā)生機制作了較為系統(tǒng)的研究。主要結果如下： 一、PASMC的結構變化在HPH發(fā)生、發(fā)展中的作用 (1) 正常肺腺泡內動脈中非肌性動脈(NMA)構成比最大，因此其對肺血流量和阻力的改變有很大緩沖作用，具有很大的代償能力；而IAA的另兩組份——肌性動脈(MA)和部分肌性動脈(PMA)則是控制PAP的主要血管段。實驗結果表明，缺氧1d，IAA即出現(xiàn)肌化(MA增多、NMA減少)，并隨缺氧時間延長而加重，導致阻力段血管延長，致使PAP升高，二者呈密切相關。肺血管結構變化的這一特點無疑是HPH發(fā)生的結構基礎。 (2) 首次在整體動物上觀察到，缺氧后還可能存在PASMC表型的動態(tài)變化。即整個缺氧進程中(1～40d)，隨著缺氧時間的延長，部分PASMC有由收縮表型→部分合成表型→合成表型→部分合成表型→收縮表型轉變的可能性。相應肺動脈壁羥脯氨酸(膠原的主要結構氨基酸)含量亦由持續(xù)增加過渡到出現(xiàn)下降趨勢。提示缺氧狀態(tài)下，PASMC表型變化不是固定不變，血管結構重建有可逆的可能，為HPH防治顯示了較...

【文章頁數】：105 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文縮寫詞
1.文獻綜述
2.前言
3.材料與方法
    3.1.主要試劑及儀器
    3.2.主要溶液的配制
    3.3.整體動物實驗
        3.3.1.動物模型
        3.3.2.血流動力學指標測定
        3.3.3.IAA結構觀察
            3.3.3.1.IAA分類計數
            3.3.3.2.IAA內膜面積測量及EC核計數
            3.3.3.3.IAA超微結構觀察
        3.3.4.肺外動脈結構與相應功能的觀察
            3.3.4.1.超微結構觀察
            3.3.4.2.離體肺動脈環(huán)Ach內皮依賴性舒張反應的測定
            3.3.4.3.肺動脈壁羥脯氨酸含量測定
    3.4.離體細胞培養(yǎng)
        3.4.1.成年牛、新生小牛PASMC體外培養(yǎng)及生長曲線
            3.4.1.1.貼塊法培養(yǎng)PASMC
            3.4.1.2.繪制生長曲線
        3.4.2.培養(yǎng)PASMC缺氧模型的建立及有關指標測定、藥物干預實驗
            3.4.2.1.相對生長靜息PASMC的獲取
            3.4.2.2.缺氧模型
            3.4.2.3.³H-TdR參入法檢測PASMC DNA合成
            3.4.2.4.DNA含量測定
            3.4.2.5.影響PASMC ³H-TdR參入的藥物干預實驗
        3.4.3.培養(yǎng)PASMC透射電鏡標本制備
        3.4.4.新生小牛、成年牛PAEC培養(yǎng)、缺氧實驗、缺氧EC條件培養(yǎng)液(HECCM)對培養(yǎng)PASMC ³H-TdR參入的影響
            3.4.4.1.PAEC體外培養(yǎng)
            3.4.4.2.缺氧實驗
            3.4.4.3.HECCM的收集及對培養(yǎng)PASMC ³H-TdR參入的影響
        3.4.5.利用核酸分子原位雜交技術檢測培養(yǎng)PASHC內原癌基因mRNA表達
            3.4.5.1.平滑肌(SM)α-actin及非肌性(NM)β-actin基因質粒轉化、擴增
            3.4.5.2.光敏生物素直接標記SM α-actin和NM β-actin目的基因質粒DNA
            3.4.5.3.培養(yǎng)PASMC原位雜交
        3.4.6.培養(yǎng)PASMC總RNA的c-myc斑點及Northern膜印跡雜交
            3.4.6.1.細胞總RNA的提取
            3.4.6.2.c-myc斑點雜交
            3.4.6.3.Northern膜印跡雜交
            3.4.6.4.用隨機寡核苷酸引物合成均一標記的c-myo cDNA探針
            3.4.6.5.分子雜交及放射自顯影
    3.5.數據處理
4.結果
    4.1.IAA肌化與肺循環(huán)血流動力學變化趨勢的關系
    4.2.肺動脈中膜SMC表型及肺動脈壁羥脯氨酸含量變化與PAP的關系
    4.3.肺動脈EC結構及Ach內皮依賴性舒張反應的動態(tài)變化
    4.4.缺氧時培養(yǎng)PAEC的變化及PAEC對SMC增殖的影響
    4.5.缺氧對培養(yǎng)PASMC的直接影響
        4.5.1.缺氧對PASMC增殖的影響
        4.5.2.缺氧對PASMC表型的影響
        4.5.3.缺氧對施用了細胞信息傳導途徑干預藥物后PASMC ³H-TdR參入的影響
            4.5.3.1.異搏定、H7

            4.5.3.2.PMA、EGF
            4.5.3.3.EGF+PMA、異搏定+PMA復合作用
        4.5.4.缺氧對PASMC c-myc mRNA表達的影響
    4.6.764-3對PASMC ³H-TdR參入的影響
附：1.電鏡照片插圖
    2.照片說明
5.討論
    5.1.PASMC的結構變化在缺氧性肺動脈高壓發(fā)生、發(fā)展中的作用
    5.2.缺氧時PASMC結構變化的原因
        5.2.1.PAEC結構和功能的變化對PASMC的影響
        5.2.2.缺氧對SMC結構變化的直接影響及其作用途徑初探
6.總結
7.參考文獻
8.英文摘要
已發(fā)表和待發(fā)表的研究論文及論文摘要
致謝



本文編號：3801132

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