目的探討甲醇誘導(dǎo)濃度和誘導(dǎo)時(shí)間對(duì)登革病毒(dengue virus,DENV)四型聯(lián)合重組包膜蛋白Ⅲ區(qū)(envelope domainⅢ,EDⅢ)表達(dá)的影響,以期實(shí)現(xiàn)該蛋白在畢赤酵母中的高效表達(dá)。方法采用不同濃度甲醇(0. 05%、0. 1%、0. 25%、0. 5%、0. 75%、1%、1. 5%、2%、2. 5%、3%、5%、7. 5%)誘導(dǎo)表達(dá)帶His標(biāo)簽的DENV四型聯(lián)合重組EDⅢ蛋白,分別誘導(dǎo)18、24、30、48、72 h,樣品經(jīng)Western blot檢測(cè)。最佳條件下誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白液經(jīng)Ni-Agarose His親和層析純化后,進(jìn)行10%SDS-PAGE檢測(cè)。結(jié)果最佳甲醇誘導(dǎo)濃度為2. 5%,最佳甲醇誘導(dǎo)時(shí)間為72 h。純化產(chǎn)物經(jīng)10%SDS-PAGE檢測(cè),于相對(duì)分子質(zhì)量約41 000處可見(jiàn)單一目的蛋白條帶,純度為99%。結(jié)論當(dāng)甲醇濃度為2. 5%,誘導(dǎo)時(shí)間為72 h時(shí),可實(shí)現(xiàn)DENV四型聯(lián)合重組EDⅢ蛋白在畢赤酵母中的高效表達(dá)。

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株
    1.2 主要試劑
    1.3 甲醇誘導(dǎo)DENV四型聯(lián)合重組EDⅢ蛋白表達(dá)條件的優(yōu)化
        1.3.1 甲醇誘導(dǎo)濃度
        1.3.2 甲醇誘導(dǎo)時(shí)間
    1.4 酵母菌體蛋白的提取
    1.5 菌體蛋白的鑒定
    1.6 蛋白的純化及鑒定
2 結(jié)果
    2.1 甲醇誘導(dǎo)DENV四型聯(lián)合重組EDⅢ蛋白的最適表達(dá)條件
        2.1.1 甲醇誘導(dǎo)濃度
        2.1.2 甲醇誘導(dǎo)時(shí)間
    2.2 DENV四型聯(lián)合重組EDⅢ蛋白的純化
3 討論



本文編號(hào)：3799854