金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，S.aureus)可引起一系列不同程度的感染；一個(gè)不太嚴(yán)重的傷口感染可發(fā)展為惡性的敗血癥、骨髓炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎或是心內(nèi)膜炎。S.aureus更是醫(yī)院感染中最常見(jiàn)的病原菌之一。甲氧西林抗性的金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistant S.aureus,MRSA)菌株，可抵抗大多數(shù)臨床上應(yīng)用的抗生素。令人憂(yōu)慮的是，MRSA菌株對(duì)治療葡萄球菌感染最為有效的抗生素——萬(wàn)古霉素的敏感性日益降低，這些對(duì)萬(wàn)古霉素不敏感的金黃色葡萄球菌(Vancomysin-intermediate S.aureus，VISA)菌株的出現(xiàn)使人們產(chǎn)生了金葡菌感染不能治愈的恐懼感，因此必須尋找到一種有效的治療方法。 研究表明，基于金葡菌細(xì)胞外結(jié)合基質(zhì)蛋白(ECMBPs)的重組蛋白疫苗對(duì)于機(jī)體更有保護(hù)效果。基于PCR技術(shù)，分別擴(kuò)增了纖連蛋白結(jié)合蛋白(FnBP)和膠原蛋白結(jié)合蛋白(Cna)的基因fnb和cna。并克隆于原核表達(dá)載體pET-32a(+)，分別構(gòu)建了融合基因表達(dá)質(zhì)粒trx-fnb-pET-32a(+)，trx-cna-pET-32...

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 尋求新的抗S.aureus感染的疫苗
    1.2 細(xì)胞外結(jié)合基質(zhì)蛋白(ECMBPs)
    1.3 ECMBPs是真正的毒力因子嗎
    1.4 幾種重要的MSCRAMMs
2 選題依據(jù)
3 實(shí)驗(yàn)研究
    3.1 金葡球菌表面蛋白cna，fnb基因在大腸桿菌中的克隆表達(dá)、純化
        3.1.1 材料
        3.1.2 儀器
        3.1.3 方法
    3.2 金黃色葡萄球菌表面蛋白can-fnb基因在大腸桿菌中的融合表達(dá)
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 Trx-FnBP、Cna、Trx-Cna、TrxCn-fnBP蛋白免疫效應(yīng)研究
        3.3.1 材料
        3.3.2 實(shí)驗(yàn)方法
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 金葡球菌表面蛋白cna，fnb基因在大腸桿菌中的克隆表達(dá)、純化結(jié)果
        4.1.1 目的基因的擴(kuò)增
        4.1.2 fnb-T質(zhì)粒，cna-T質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.1.3 序列測(cè)定
        4.1.4 表達(dá)質(zhì)粒trx-fnb-pET-32a(+)，trx-cna-pET-32a(+)的構(gòu)建
        4.1.5 重組trx-fnb-pET-32a(+)，trx-cna-pET-32a(+)的表達(dá)
        4.1.6 蛋白純化結(jié)果
        4.1.7 純化蛋白的定量
    4.2 金葡菌表面蛋白can-fnb基因在大腸桿菌中的融合表達(dá)、純化結(jié)果
        4.2.1 目的基因的擴(kuò)增
        4.2.2 Cna+fnb-T質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.2.3 序列測(cè)定及分析
        4.2.4 Cna+fnb-pET-32a(+)質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.2.5 Cna-fnBP蛋白的表達(dá)結(jié)果
        4.2.6 Cna-fnBP蛋白的純化
        4.2.7 Cna-fnBP蛋白的定量結(jié)果
    4.3 金黃色葡萄球菌表面蛋白免疫效應(yīng)結(jié)果分析
        4.3.1 免疫Balb／c雌性小鼠血清抗體滴度變化
        4.3.2 免疫小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        4.3.3 中性粒細(xì)胞的調(diào)理吞噬作用
        4.3.4 免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)
        4.3.5 Western Blot分析
5 討論
    5.1 引物的設(shè)計(jì)及PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
    5.2 表達(dá)載體的選擇
    5.3 ECMBPs作為疫苗的研究
    5.4 靶抗原基因的融合是新型疫苗發(fā)展的新方向
    5.5 間接ELISA測(cè)抗體效價(jià)結(jié)果分析
    5.6 動(dòng)物免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)方案
總結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的科研成果



本文編號(hào)：3785260