瘧疾是由瘧原蟲(chóng)引起的一種嚴(yán)重的寄生蟲(chóng)病。其中,惡性瘧原蟲(chóng)是導(dǎo)致人類(lèi)瘧疾感染致死率最高的病原體。惡性瘧原蟲(chóng)的生活史包括在人體內(nèi)的無(wú)性繁殖階段(紅外期和紅內(nèi)期)以及在蚊體內(nèi)的有性繁殖期(蚊期)。惡性瘧原蟲(chóng)在紅細(xì)胞內(nèi)期的裂體增殖是瘧疾發(fā)作的基礎(chǔ),包括從裂殖子侵入紅細(xì)胞開(kāi)始的裂殖子期、環(huán)狀體期、早期和晚期滋養(yǎng)體期直至裂殖體期。研究惡性瘧原蟲(chóng)在紅細(xì)胞內(nèi)的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程具有非常重要的意義。長(zhǎng)鏈非編碼RNA是一類(lèi)長(zhǎng)度大于200核苷酸并且不具有蛋白編碼能力的轉(zhuǎn)錄本,占全部非編碼RNA的近80%。研究表明,lncRNA可通過(guò)繁復(fù)的機(jī)制參與有機(jī)體的各種活動(dòng),如表觀(guān)遺傳學(xué)修飾、轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控以及剪切拼接控制細(xì)胞周期、細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡等。惡性瘧原蟲(chóng)基因組轉(zhuǎn)錄大量的lncRNA,但這些lncRNA在惡性瘧原蟲(chóng)的增殖發(fā)育過(guò)程中的作用卻知之甚少。為了探索惡性瘧原蟲(chóng)紅內(nèi)期不同發(fā)育階段的lncRNA表達(dá)譜及其特異性。本研究采用山梨醇連續(xù)多次處理體外培養(yǎng)并處于環(huán)狀體的惡性瘧原蟲(chóng)蟲(chóng)株,獲得高度同步化、窗口小、蟲(chóng)血率高并處于不同生長(zhǎng)階段的惡性瘧原蟲(chóng)蟲(chóng)株,選取環(huán)期以及裂殖體期構(gòu)建了2個(gè)時(shí)期的鏈特異性文庫(kù),并進(jìn)行Illumina...

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 瘧疾和瘧原蟲(chóng)簡(jiǎn)介
    1.2 惡性瘧原蟲(chóng)體外同步化培養(yǎng)
    1.3 長(zhǎng)鏈非編碼RNA概述
    1.4 惡性瘧原蟲(chóng)lncRNA研究進(jìn)展
2 研究策略和技術(shù)路線(xiàn)
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 P. falciparum 3D7體外培養(yǎng)
    3.2 5%D-山梨醇體外同步化培養(yǎng)P. falciparum 3D7蟲(chóng)株
    3.3 P. falciparum 3D7蟲(chóng)體收集和RNA提取
    3.4 DNase消化去除RNA樣品殘留的DNA
    3.5 RNA樣品凝膠電泳檢測(cè)
    3.6 生物信息學(xué)分析由諾和致源公司完成
    3.7 逆轉(zhuǎn)錄PCR驗(yàn)證lncRNA
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 紅內(nèi)期P. falciparum 3D7蟲(chóng)株體外同步化培養(yǎng)結(jié)果
    4.2 P. falciparum3D7 RNA的提取與質(zhì)量檢測(cè)
    4.3 illumina/Solexa雙末端測(cè)序結(jié)果分析
    4.4 lncRNAs RT-PCR驗(yàn)證
5 討論
    5.1 惡性瘧原蟲(chóng)同步化方法
    5.2 高通量測(cè)序與生物信息學(xué)結(jié)合預(yù)測(cè)新的lncRNAs
    5.3 P. falciparum 3D7的lncRNAs特點(diǎn)與期特異性表達(dá)
    5.4 P. falciparum 3D7的lncRNAs驗(yàn)證
    5.5 本研究存在不足與展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄I:本論文主觀(guān)文縮略語(yǔ)
附錄Ⅱ：碩士期間發(fā)表的文章和參加的會(huì)議
致謝



本文編號(hào)：3770490