目的通過對(duì)廣州管圓線蟲蝦紅素金屬蛋白酶基因的克隆、表達(dá)及免疫組織定位分析,探討其在蟲體中的分布及功能。方法根據(jù)蝦紅素金屬蛋白酶EST序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行RACE克隆和進(jìn)化樹分析;制備Ac-ALMP多抗血清,對(duì)廣州管圓線蟲L1,感染期L3和成蟲進(jìn)行免疫組織定位,通過Real-time PCR進(jìn)行Ac-ALMP定量分析。結(jié)果獲得廣州管圓線蟲蝦紅素金屬蛋白酶全基因序列,并將其命名為Ac-ALMP(Astacin-like metalloprotease)。進(jìn)化樹分析Ac-ALMP基因的核酸序列與Dictyocaulus viviparous同源性較高。免疫熒光定位分析Ac-ALMP在廣州管圓線蟲的各期中主要分布于消化道(腸道與食道)。定量分析顯示Ac-ALMP在各期中均有表達(dá),其中L1相對(duì)表達(dá)量較高,L3次之。結(jié)論成功對(duì)Ac-ALMP蛋白進(jìn)行了原核及真核表達(dá),定量分析Ac-ALMP在蟲體的腸道、角質(zhì)層、精巢、體壁等均有分布,推測(cè)Ac-ALMP在廣州管圓線蟲寄生過程中起重要作用,可為廣州管圓線蟲病的防治及疫苗開發(fā)提供參考。

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        1.1 蟲卵和菌體
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 廣州管圓線蟲RNA的提取及cDNA的合成
        2.2 RACE-cDNA的合成及目的基因做PCR擴(kuò)增
        2.3 Ac-ALMP蛋白的原核表達(dá)
        2.4 目的蛋白Western blot分析
        2.5 Ac-ALMP蛋白的真核表達(dá)
        2.6 多克隆抗血清制備
        2.7 細(xì)胞免疫熒光試驗(yàn)
        2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié) 果
    1 廣州管圓線蟲蝦紅素金屬蛋白酶全基因的獲取
    2 Ac-ALMP生物信息學(xué)分析
    3 Ac-ALMP原核及真核表達(dá)克隆構(gòu)建
    4 Ac-ALMP蛋白的表達(dá)及驗(yàn)證
    5 Ac-ALMP在廣州管圓線蟲各期的表達(dá)分析
    6 Ac-ALMP在廣州管圓線蟲各發(fā)育期的熒光定位
討 論



本文編號(hào)：3755922