目的采用哺乳動物細(xì)胞表面展示技術(shù)構(gòu)建間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化因子(c-Met)嵌合抗體3E1D7的重鏈補(bǔ)體決定區(qū)3(CDR3)隨機(jī)突變抗體庫。方法用定向進(jìn)化的方法在嵌合抗體3E1D7重鏈CDR3內(nèi)部造成基因隨機(jī)突變,將其通過雙酶切克隆到哺乳動物細(xì)胞展示載體pSZI-CD中構(gòu)建隨機(jī)突變抗體庫�？贵w庫基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測抗體基因是否在細(xì)胞表面表達(dá)。結(jié)果 3E1D7重鏈CDR3隨機(jī)突變抗體庫構(gòu)建成功,庫容量達(dá)到5.52×10⁶。隨機(jī)挑選20個陽性克隆進(jìn)行測序鑒定, 20個克隆均在不同位置發(fā)生堿基突變且沒有重復(fù)突變,編碼20種不同的氨基酸序列,抗體庫具有較好的多樣性和隨機(jī)性。流式細(xì)胞術(shù)分析抗體基因庫上膜情況,均檢測到全長抗體在CHO細(xì)胞表面的表達(dá)。結(jié)論通過哺乳動物細(xì)胞表面展示技術(shù),成功構(gòu)建了庫容量達(dá)到5.52×10⁶的c-Met嵌合抗體重鏈CDR3隨機(jī)突變抗體庫。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 構(gòu)建嵌合抗體3E1D7重鏈CDR3隨機(jī)突變抗體庫
        1.2.2 轉(zhuǎn)染CHO抗體展示細(xì)胞系
        1.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測抗體在CHO細(xì)胞表面的表達(dá)
2 結(jié)果
    2.1 3E1D7重鏈CDR3隨機(jī)突變抗體基因的擴(kuò)增
    2.2 隨機(jī)突變抗體基因純化和酶切處理
    2.3 嵌合抗體3E1D7的CDR3隨機(jī)突變抗體庫具有較好的多樣性和隨機(jī)性, 庫容量達(dá)到5.52×106
    2.4 轉(zhuǎn)染后抗體在細(xì)胞表面表達(dá)
    2.5 潮霉素篩選后細(xì)胞表面抗體表達(dá)增加
3 討論



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