目的:通過建立體外心肌細胞缺氧模型,觀察Rho相關(guān)的卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）在不同缺氧時點的表達,探討其在心肌細胞凋亡中的作用。方法:（1）原代培養(yǎng)SD乳鼠心肌細胞,并用抗α-橫紋肌肌動蛋白免疫組化法進行鑒定。（2）利用缺氧液和缺氧盒,建立心肌細胞缺氧模型,分別缺氧培養(yǎng)1 h、3 h、6 h、9 h,以正常氧培養(yǎng)的心肌細胞作為對照。（3）用流式細胞儀檢測心肌細胞凋亡,MTT檢測細胞存活率,Western blotting檢測ROCK-1、ROCK-2、caspase-3活化片段、PI3K和p-PI3K的表達情況。結(jié)果:（1）缺氧1 h、3 h、6 h、9 h后,心肌細胞凋亡率分別為（8.76±1.51）%、（15.36±2.34）%、（26.50±3.43）%、（41.96±4.22）%,與對照組[2.60±0.34)%]比較均有顯著差異（P＜0.01）;存活率分別為（93.20±4.12）%、（86.14±3.10）%、（75.53±7.25）%、（60.21±6.75）%,與對照組[（97.60±1.12）%]比較均有顯著差異（P＜0.05）。（2）ROCK-1和ROCK-2缺... 

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【文章目錄】：
材料和方法
    1 材料
    2 方法
        2.1 原代心肌細胞的培養(yǎng)及鑒定
        2.2 心肌細胞缺氧模型制備及各種條件培養(yǎng)
        2.3 MTT法檢測心肌細胞成活率
        2.4 流式細胞儀檢測細胞凋亡率
        2.5 全自動生化分析儀檢測乳酸脫氫酶 (lactate de-hydrogenase, LDH)
        2.6 Western blotting
    3 統(tǒng)計學(xué)處理
結(jié)果
    1心肌細胞的鑒定
    2心肌細胞存活率、凋亡率及上清液LDH的變化
    3 心肌細胞中ROCK-1、ROCK-2蛋白表達
    4 心肌細胞中PI3K和p-PI3K的表達
    5 缺氧后心肌細胞中caspase-3蛋白表達
討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]rAAV1-SERCA2a轉(zhuǎn)染改善心力衰竭犬心功能及其機制探討[J]. 米亞非,李小鷹,江建軍,付治卿,魯曉春.  中國病理生理雜志. 2014(02)



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