發(fā)布時間：2022-12-07 23:24

　　目的 構(gòu)建人抗HBsAg單鏈抗體基因，在真核細(xì)胞和原核細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)，并對其表達(dá)產(chǎn)物的活性進(jìn)行鑒定。 方法 以從噬菌體抗體庫中篩選獲得的抗HBsAg的Fab抗體基因為模板，分別擴(kuò)增出其輕、重鏈可變區(qū)（V_L、V_H）基因，通過重組PCR方法將輕、重鏈可變區(qū)基因用連接肽（Gly₄Ser）₃的編碼序列連接，并引入前導(dǎo)肽編碼序列，構(gòu)建具有L-V_H-Linker-V_L結(jié)構(gòu)的單鏈抗體基因。 將所構(gòu)建的單鏈抗體基因克隆入綠色熒光蛋白融合表達(dá)載體pEGFP-N3，瞬時轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞，分析其表達(dá)情況。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞，建立穩(wěn)定表達(dá)ScFv融合蛋白的細(xì)胞系，并分析其表達(dá)產(chǎn)物的活性。 將獲得的不含前導(dǎo)肽的單鏈抗體基因克隆入HA和6His融合的原核表達(dá)載體pTAT-HA，在大腸桿菌BL21中進(jìn)行表達(dá)，分析其表達(dá)情況。表達(dá)產(chǎn)物 并經(jīng)NiNTA柱... 

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略語表
中文摘要
英文摘要
文獻(xiàn)回顧
    一、 單鏈抗體在基因治療中的研究進(jìn)展
    二、 乙型肝炎的基因治療策略
前言
實驗材料
研究內(nèi)容及結(jié)果
    一、 人抗HBsAg單鏈抗體基因的構(gòu)建
        1 實驗方法
        2 實驗結(jié)果
        3 討論
    二、 人抗HBsAg單鏈抗體基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)及分析
        1 實驗方法
        2 實驗結(jié)果
        3 討論
    三、 人抗HBsAg單鏈抗體基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)及分析
        1 實驗方法
        2 實驗結(jié)果
        3 討論
小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]乙型肝炎DNA疫苗誘導(dǎo)小鼠免疫反應(yīng)的實驗研究[J]. 王斌,周霞秋,諸江,謝青,臧國慶,俞紅,郭清.  中華肝臟病雜志. 2001(02)
[2]新的人抗HBsAg抗體Fab cDNA的克隆及序列分析[J]. 廖琪樺,高輝,陳南春,楊安鋼,陳蘇民,粟寬源,余宙耀.  第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2001(02)
[3]乙型肝炎病毒C區(qū)反義RNA靶向肝細(xì)胞抗病毒的研究[J]. 張建軍,陳楓,鐘森,唐坤華,史小玲,王明勇,彭建一.  中華肝臟病雜志. 2000(03)



本文編號：3713070