人抗HBsAg單鏈抗體基因的構(gòu)建、表達(dá)及其表達(dá)產(chǎn)物的活性鑒定
發(fā)布時間:2022-12-07 23:24
目的 構(gòu)建人抗HBsAg單鏈抗體基因,在真核細(xì)胞和原核細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá),并對其表達(dá)產(chǎn)物的活性進(jìn)行鑒定。 方法 以從噬菌體抗體庫中篩選獲得的抗HBsAg的Fab抗體基因為模板,分別擴(kuò)增出其輕、重鏈可變區(qū)(VL、VH)基因,通過重組PCR方法將輕、重鏈可變區(qū)基因用連接肽(Gly4Ser)3的編碼序列連接,并引入前導(dǎo)肽編碼序列,構(gòu)建具有L-VH-Linker-VL結(jié)構(gòu)的單鏈抗體基因。 將所構(gòu)建的單鏈抗體基因克隆入綠色熒光蛋白融合表達(dá)載體pEGFP-N3,瞬時轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,分析其表達(dá)情況。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞,建立穩(wěn)定表達(dá)ScFv融合蛋白的細(xì)胞系,并分析其表達(dá)產(chǎn)物的活性。 將獲得的不含前導(dǎo)肽的單鏈抗體基因克隆入HA和6His融合的原核表達(dá)載體pTAT-HA,在大腸桿菌BL21中進(jìn)行表達(dá),分析其表達(dá)情況。表達(dá)產(chǎn)物 并經(jīng)NiNTA柱...
【文章頁數(shù)】:105 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【文章目錄】:
英文縮略語表
中文摘要
英文摘要
文獻(xiàn)回顧
一、 單鏈抗體在基因治療中的研究進(jìn)展
二、 乙型肝炎的基因治療策略
前言
實驗材料
研究內(nèi)容及結(jié)果
一、 人抗HBsAg單鏈抗體基因的構(gòu)建
1 實驗方法
2 實驗結(jié)果
3 討論
二、 人抗HBsAg單鏈抗體基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)及分析
1 實驗方法
2 實驗結(jié)果
3 討論
三、 人抗HBsAg單鏈抗體基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)及分析
1 實驗方法
2 實驗結(jié)果
3 討論
小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]乙型肝炎DNA疫苗誘導(dǎo)小鼠免疫反應(yīng)的實驗研究[J]. 王斌,周霞秋,諸江,謝青,臧國慶,俞紅,郭清. 中華肝臟病雜志. 2001(02)
[2]新的人抗HBsAg抗體Fab cDNA的克隆及序列分析[J]. 廖琪樺,高輝,陳南春,楊安鋼,陳蘇民,粟寬源,余宙耀. 第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2001(02)
[3]乙型肝炎病毒C區(qū)反義RNA靶向肝細(xì)胞抗病毒的研究[J]. 張建軍,陳楓,鐘森,唐坤華,史小玲,王明勇,彭建一. 中華肝臟病雜志. 2000(03)
本文編號:3713070
【文章頁數(shù)】:105 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【文章目錄】:
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文獻(xiàn)回顧
一、 單鏈抗體在基因治療中的研究進(jìn)展
二、 乙型肝炎的基因治療策略
前言
實驗材料
研究內(nèi)容及結(jié)果
一、 人抗HBsAg單鏈抗體基因的構(gòu)建
1 實驗方法
2 實驗結(jié)果
3 討論
二、 人抗HBsAg單鏈抗體基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)及分析
1 實驗方法
2 實驗結(jié)果
3 討論
三、 人抗HBsAg單鏈抗體基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)及分析
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2 實驗結(jié)果
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小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
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期刊論文
[1]乙型肝炎DNA疫苗誘導(dǎo)小鼠免疫反應(yīng)的實驗研究[J]. 王斌,周霞秋,諸江,謝青,臧國慶,俞紅,郭清. 中華肝臟病雜志. 2001(02)
[2]新的人抗HBsAg抗體Fab cDNA的克隆及序列分析[J]. 廖琪樺,高輝,陳南春,楊安鋼,陳蘇民,粟寬源,余宙耀. 第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2001(02)
[3]乙型肝炎病毒C區(qū)反義RNA靶向肝細(xì)胞抗病毒的研究[J]. 張建軍,陳楓,鐘森,唐坤華,史小玲,王明勇,彭建一. 中華肝臟病雜志. 2000(03)
本文編號:3713070
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