IL-4是一種在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用的具有多種功能的細胞因子，在人類IL-4主要由活化T細胞和肥大細胞產(chǎn)生，成熟人IL-4是分子量為18～19kDa的糖蛋白。IL-4可促使活化的B細胞分裂增殖，并增強B細胞抗原提呈的能力。IL-4是Ig重鏈基因類轉(zhuǎn)換的主要調(diào)節(jié)因子，能促使B細胞表達和分泌IgE。IL-4也是CD4+T細胞的自分泌生長因子，促使Th0細胞向Th2細胞分化。此外，IL-4還可以調(diào)節(jié)造血干細胞的增殖和分化。由IL-4和粒單細胞集落刺激因子（GM-CSF）等多種細胞因子組成的培養(yǎng)體系可在體外誘導樹突狀細胞（DC）前體細胞——單核細胞，從而獲得大量單核細胞來源的DC。DC作為人體內(nèi)最有效的專職抗原提呈細胞,在人體的抗腫瘤免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。因此，IL-4在抗腫瘤免疫治療方面具有很大潛力，它作為腫瘤免疫調(diào)節(jié)劑已進入Ⅱ期臨床試驗。 凝血因子Xa是血液凝固所必須的一種糖蛋白。凝血因子Xa首先在氨基酸序列Ile-Glu-Gly-Arg中Arg后切割融合蛋白，因此，常被用來切割含有凝血因子Xa蛋白酶切位點的融合蛋白，以獲得具有天然氨基酸序列的蛋白質(zhì)。 ... 

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
提要
英文縮寫詞表
前言
    1 IL-4的研究背景
        1.1 IL-4的產(chǎn)生、分子結(jié)構(gòu)、基因及其受體
        1.2 IL-4的生物學活性
        1.3 IL-4的應(yīng)用價值
    2 分子伴侶的研究現(xiàn)狀
        2.1 分子伴侶的性質(zhì)
        2.2 分子伴侶的分類
        2.3 分子伴侶的功能
        2.4 分子伴侶在基因重組技術(shù)中的應(yīng)用
    3 固定化金屬螯合親和層析研究進展
        3.1 固定化金屬螯合親和層析的基本原理
        3.2 固定化金屬螯合親和層析在生命科學領(lǐng)域中的應(yīng)用
材料與方法
    1 主要材料
        1.1 限制性內(nèi)切酶及其它試劑
        1.2 質(zhì)粒與菌株
        1.3 引物合成:由上海生物工程公司合成
        1.4 層析柱
        1.5 培養(yǎng)基
    2 主要方法
        2.1 采用PCR法擴增目的基因
        2.2 DNA片段的TA克隆
        2.3 相關(guān)質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.4 重組IL-4融合蛋白的誘導表達
        2.5 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定表達產(chǎn)物
        2.6 Western印記鑒定表達產(chǎn)物
        2.7 用鎳親和層析的方法分別純化兩種重組融合蛋白
實驗結(jié)果
    1 PCR法擴增目的基因及目的片段的TA克隆
        1.1 FIL-4與HisFIL-4基因的擴增及TA克隆
        1.2 HisCpn10基因的擴增及TA克隆
    2 重組質(zhì)粒pET28a-FIL-4的構(gòu)建
    3 重組質(zhì)粒pET28a-HisCpn10與pET28a-Cpn10的構(gòu)建
        3.1 重組質(zhì)粒pET28a-HisCpn10的構(gòu)建
        3.2 重組質(zhì)粒pET28a-Cpn10的構(gòu)建
    4 重組質(zhì)粒ET28a-HisCpn10-FIL-4pET28a-Cpn10-HisFIL-4的構(gòu)建
        4.1 重組質(zhì)粒pET28a-HisCpn10-FIL-4的構(gòu)建
        4.2 重組質(zhì)粒pET28a-Cpn10-HisFIL-4的構(gòu)建
    5 FIL-4、HisCpn10-FIL-4和Cpn10-HisFIL-4三種重組融合蛋白在大腸桿菌中的誘導表達及SDS-PAGE鑒定
    6 Western印記結(jié)果
    7 鎳親和層析純化結(jié)果
圖和照片
討論
    1 重組IL-4融合蛋白在大腸桿菌中的誘導表達
    2 6×His tag在重組蛋白中的位置對鎳親和層析的影響
結(jié) 論
參 考 文 獻
致 謝
攻讀碩士學位期間已(待)發(fā)表的文章
中文摘要
ABSTRACT


【參考文獻】：
期刊論文
[1]樹突狀細胞與免疫激活和免疫耐受[J]. 于益芝,曹雪濤.  第二軍醫(yī)大學學報. 2002(10)



本文編號：3701115