弓形蟲(chóng)GRA1基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其DNA與cDNA序列的比較
發(fā)布時(shí)間:2022-10-29 20:45
弓形蟲(chóng)是世界性分布的專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲(chóng),可引起人獸共患的弓形蟲(chóng)病。成人弓形蟲(chóng)感染多呈無(wú)癥狀帶蟲(chóng)狀態(tài),但先天感染可導(dǎo)致流產(chǎn)、畸胎或死胎,在免疫缺陷者(如器官移植、惡性腫瘤、應(yīng)用免疫抑制劑者及AIDS患者等)常是致死的主要原因之一,此外弓形蟲(chóng)也可引起禽畜疾病,給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此,弓形蟲(chóng)病的防治對(duì)人類健康、優(yōu)生優(yōu)育及畜牧業(yè)發(fā)展等具有重大意義。 乙胺嘧啶聯(lián)合磺胺嘧啶可有效治療弓形蟲(chóng)病,然而上述藥物常引起嚴(yán)重的副反應(yīng),尤其在AIDS患者,常因此而中斷治療引起疾病復(fù)發(fā),在孕期前16周感染弓形蟲(chóng)的孕婦因乙胺嘧啶潛在的致畸作用而禁用該類藥物。因而,研制弓形蟲(chóng)疫苗已迫在眉睫。幾十年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者在這方面進(jìn)行了大量的基礎(chǔ)性研究。經(jīng)歷了減毒活疫苗、亞單位疫苗后,出現(xiàn)了核酸疫苗。核酸疫苗是將某種保護(hù)性抗原的編碼基因,克隆到真核細(xì)胞表達(dá)調(diào)控序列的質(zhì)粒中,制成的DNA重組質(zhì)粒直接接種宿主,宿主細(xì)胞攝取質(zhì)粒后通過(guò)轉(zhuǎn)錄翻譯,表達(dá)保護(hù)性抗原蛋白,從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生對(duì)該抗原的保護(hù)性免疫應(yīng)答。與其他疫苗相比,核酸疫苗具有以下優(yōu)點(diǎn):1操作簡(jiǎn)單,只需接種質(zhì)粒即可,其為體內(nèi)真核表達(dá),無(wú)須體外表達(dá)純...
【文章頁(yè)數(shù)】:45 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
前言
第一章 弓形蟲(chóng)病免疫學(xué)研究現(xiàn)狀
1 宿主感染后的免疫效應(yīng)
1.1 細(xì)胞免疫
1.2 體液免疫
2 免疫診斷
2.1 檢測(cè)抗體
2.2 檢測(cè)抗原
3 疫苗的研制進(jìn)展
3.1 減毒活疫苗
3.2 亞單位疫苗
3.3 核酸疫苗
第二章 弓形蟲(chóng)GRA1基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
1 材料與方法
1.1 材料
1.2 方法
2 結(jié)果
2.1 GRA1基因的RT-PCR擴(kuò)增
2.2 pcDNA3-GRA1重組質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
2.3 序列分析
3 討論
3.1 保護(hù)性抗原基因的選擇
3.2 真核表達(dá)系統(tǒng)的選擇
3.3 目的基因的擴(kuò)增
4 小結(jié)
第三章 弓形蟲(chóng)GRA1基因DNA序列及其與cDNA序列分析比較
1 材料與方法
1.1 材料
1.2 方法
2 結(jié)果
2.1 GRA1基因PCR的擴(kuò)增結(jié)果
2.2 T-A克隆重組質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
2.3 GRA1基因DNA序列及其與cDNA序列
3 討論
3.1 核基因mRNA內(nèi)含子特點(diǎn)
3.2 DNA與cDNA序列單堿基差異與RNA編輯
3.3 實(shí)驗(yàn)方法的選擇
4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
中文摘要
英文摘要
附錄
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]弓形蟲(chóng)侵入相關(guān)分子棒狀體蛋白1基因重組質(zhì)粒的克隆及其DNA免疫研究(英文)[J]. 陳觀今,郭虹,呂芳麗,鄭煥欽. Chinese Medical Journal. 2001(08)
[2]Immunity induced by DNA vaccine of plasmid encoding the rhoptry protein 1 gene combined with the genetic adjuvant of pcIFN-γ against Toxoplasma gondii in mice[J]. 郭虹,陳觀今,呂芳麗,陳海峰,鄭煥欽. Chinese Medical Journal. 2001(03)
[3]IL-6對(duì)IFNγ誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞抗弓形蟲(chóng)作用的影響[J]. 譚巖,方艷秋,楊貴貞,李淑紅. 上海免疫學(xué)雜志. 1999(01)
[4]不同血清學(xué)方法診斷弓形蟲(chóng)病的比較[J]. 呂元聰,崔君兆,鄭挺,謝麗群. 廣西預(yù)防醫(yī)學(xué). 1995(05)
[5]免疫酶染色試驗(yàn)診斷弓形蟲(chóng)感染的初步研究[J]. 呂元聰,鄭挺,崔君兆,謝麗群. 預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志. 1994(01)
本文編號(hào):3698391
【文章頁(yè)數(shù)】:45 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
前言
第一章 弓形蟲(chóng)病免疫學(xué)研究現(xiàn)狀
1 宿主感染后的免疫效應(yīng)
1.1 細(xì)胞免疫
1.2 體液免疫
2 免疫診斷
2.1 檢測(cè)抗體
2.2 檢測(cè)抗原
3 疫苗的研制進(jìn)展
3.1 減毒活疫苗
3.2 亞單位疫苗
3.3 核酸疫苗
第二章 弓形蟲(chóng)GRA1基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
1 材料與方法
1.1 材料
1.2 方法
2 結(jié)果
2.1 GRA1基因的RT-PCR擴(kuò)增
2.2 pcDNA3-GRA1重組質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
2.3 序列分析
3 討論
3.1 保護(hù)性抗原基因的選擇
3.2 真核表達(dá)系統(tǒng)的選擇
3.3 目的基因的擴(kuò)增
4 小結(jié)
第三章 弓形蟲(chóng)GRA1基因DNA序列及其與cDNA序列分析比較
1 材料與方法
1.1 材料
1.2 方法
2 結(jié)果
2.1 GRA1基因PCR的擴(kuò)增結(jié)果
2.2 T-A克隆重組質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
2.3 GRA1基因DNA序列及其與cDNA序列
3 討論
3.1 核基因mRNA內(nèi)含子特點(diǎn)
3.2 DNA與cDNA序列單堿基差異與RNA編輯
3.3 實(shí)驗(yàn)方法的選擇
4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
中文摘要
英文摘要
附錄
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]弓形蟲(chóng)侵入相關(guān)分子棒狀體蛋白1基因重組質(zhì)粒的克隆及其DNA免疫研究(英文)[J]. 陳觀今,郭虹,呂芳麗,鄭煥欽. Chinese Medical Journal. 2001(08)
[2]Immunity induced by DNA vaccine of plasmid encoding the rhoptry protein 1 gene combined with the genetic adjuvant of pcIFN-γ against Toxoplasma gondii in mice[J]. 郭虹,陳觀今,呂芳麗,陳海峰,鄭煥欽. Chinese Medical Journal. 2001(03)
[3]IL-6對(duì)IFNγ誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞抗弓形蟲(chóng)作用的影響[J]. 譚巖,方艷秋,楊貴貞,李淑紅. 上海免疫學(xué)雜志. 1999(01)
[4]不同血清學(xué)方法診斷弓形蟲(chóng)病的比較[J]. 呂元聰,崔君兆,鄭挺,謝麗群. 廣西預(yù)防醫(yī)學(xué). 1995(05)
[5]免疫酶染色試驗(yàn)診斷弓形蟲(chóng)感染的初步研究[J]. 呂元聰,鄭挺,崔君兆,謝麗群. 預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志. 1994(01)
本文編號(hào):3698391
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