【目的】探討囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子（CFTR）對(duì)內(nèi)臟脂肪組織前脂肪細(xì)胞增殖和分化的調(diào)控作用�！痉椒ā糠謩e采用CFTR基因敲除小鼠（CFTR KO）4、8周齡及同周齡野生型對(duì)照鼠,分離內(nèi)臟脂肪組織前脂肪細(xì)胞,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）技術(shù)檢測(cè)增殖分化轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)變化。采用地塞米松-異丁基甲基黃嘌呤-胰島素（DMI）誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞建立前脂肪細(xì)胞分化模型,采用免疫印跡（Western blot）技術(shù)檢測(cè)CFTR及分化因子蛋白表達(dá)變化;并進(jìn)一步轉(zhuǎn)染CFTR沉默及過(guò)表達(dá)病毒,采用免疫印跡,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),MTT檢測(cè)和油紅O染色,觀察基因干預(yù)CFTR后對(duì)DMI誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞增殖及分化的影響。采用高脂飲食肥胖小鼠模型,熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)內(nèi)臟前脂肪細(xì)胞增殖分化轉(zhuǎn)錄因子和CFTR基因水平表達(dá)�！窘Y(jié)果】CFTR基因敲除鼠內(nèi)臟前脂肪細(xì)胞指標(biāo)Pref-1,增殖因子CyclinD1,分化轉(zhuǎn)錄因子PPARγ,C/EBPα表達(dá)明顯降低（P<0.05）。DMI誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞分化早期,CFTR的表達(dá)增加（P<0.05）;轉(zhuǎn)染CFTR沉默病毒后,抑制DMI誘導(dǎo)的... 

【文章頁(yè)數(shù)】：11 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和分組
    1.2 主要材料
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 前脂肪細(xì)胞的分離
        1.3.2 3T3-L1細(xì)胞培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化
        1.3.3 免疫印跡法
        1.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR (RT-qPCR)
        1.3.5 CFTR沉默和過(guò)表達(dá)病毒轉(zhuǎn)染
        1.3.6 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖
        1.3.7 油紅O染色檢測(cè)脂滴形成
    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 CFTR基因敲除鼠內(nèi)臟前脂肪細(xì)胞增殖和分化指標(biāo)下降
    2.2 3T3-L1細(xì)胞早期分化中CFTR的表達(dá)變化
    2.3 CFTR對(duì)3T3-L1細(xì)胞早期增殖型分化的影響
    2.4 CFTR對(duì)3T3-L1細(xì)胞分化末期的影響
    2.5高脂飲食肥胖小鼠模型早期前脂肪細(xì)胞CFTR基因表達(dá)增強(qiáng)
3 討論



本文編號(hào)：3672049