目的比較無(wú)去污劑的細(xì)胞總蛋白三種酶切樣品制備方法。方法采用細(xì)胞吸入膠內(nèi)酶切法、蛋白吸入膠內(nèi)酶切法及超濾管輔助溶液酶切法對(duì)細(xì)胞總蛋白進(jìn)行酶切,再用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)三種酶切方法制備的多肽樣品進(jìn)行蛋白鑒定。結(jié)果通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)鑒定,細(xì)胞吸入膠內(nèi)酶切法制備的樣品獲得3 835個(gè)蛋白,蛋白吸入膠內(nèi)酶切法制備的樣品獲得2 340個(gè)蛋白,超濾管輔助溶液酶切法制備的樣品獲得4 248個(gè)蛋白。韋恩圖分析顯示,不同酶切方法得到的蛋白種類存在差異。對(duì)細(xì)胞吸入膠內(nèi)酶切法和超濾管輔助溶液酶切法所獲得的蛋白進(jìn)行基因本體（gene ontology,GO）分析發(fā)現(xiàn),細(xì)胞吸入膠內(nèi)酶切法能獲得更多膜結(jié)合蛋白。結(jié)論三種無(wú)去污劑酶切方法,避免了去污劑的種種弊端,其中超濾管輔助溶液酶切法和細(xì)胞吸入膠內(nèi)酶切法更優(yōu)。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)樣品
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 干膠粒制備
    1.4 293T細(xì)胞蛋白提取
    1.5 細(xì)胞吸入膠內(nèi)酶切法
    1.6 蛋白吸入膠內(nèi)酶切方法
    1.7 超濾管輔助溶液酶切法
    1.8 質(zhì)譜檢測(cè)
    1.9 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果
    2.1 細(xì)胞總蛋白酶切后多肽樣品液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)結(jié)果
    2.2 三種酶切法所得樣品鑒定蛋白韋恩圖分析
    2.3 兩種較優(yōu)酶切方法所得樣品鑒定的蛋白Gene Ontology分析
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小鼠細(xì)胞差異表達(dá)蛋白SWATH定量方法的建立[J]. 胡家,李慎濤,王勁松,李蕾,殷愛(ài)紅.  首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(06)
[2]人乳牙牙髓干細(xì)胞全蛋白質(zhì)非膠分級(jí)分離電泳分析[J]. 胡家,李蕾,王勁松,趙君朋.  山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(03)
[3]Hela細(xì)胞蛋白質(zhì)分離和肽質(zhì)量指紋譜鑒定方法的建立[J]. 胡家,李燕英,孫麗翠,殷愛(ài)紅,武文琦,賀俊崎.  首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2009(03)



本文編號(hào)：3670323