目的利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建�；撬徂D(zhuǎn)運(yùn)體基因（solute carrier family 6 member 6,Slc6a6）敲除大鼠,繁殖并鑒定,為研究�；撬崛笔ι窠�(jīng)系統(tǒng)疾病的影響提供穩(wěn)定的大鼠模型。方法針對Slc6a6基因第5外顯子,設(shè)計向?qū)NA（single-guide RNA,sgRNA）介導(dǎo)Cas9核酸酶與靶點(diǎn)DNA特異性結(jié)合,并切割基因組DNA,被切割后的DNA進(jìn)行重組修復(fù),從而實(shí)現(xiàn)基因的敲除。通過基因型鑒定和測序分析檢測新生大鼠基因型。利用Real-time PCR、Western blot技術(shù)和免疫組化等方法,分析大鼠腦組織的�；撬徂D(zhuǎn)運(yùn)體（taurine transporter,TauT）的mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá),建立Slc6a6基因敲除大鼠模型。結(jié)果 F3代出現(xiàn)21只Slc6a6基因敲除純合子(TauT^-/-),54只雜合子(TauT^+/-),27只陰性(TauT^+/+),F3代純合率約為20.59%,基本符合孟德爾遺傳定律。Slc6a6基因敲除純合子大鼠腦組織mRNA水平基本不表達(dá),Ta... 

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動物
    1.2 主要試劑與儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 TauT-/-大鼠的構(gòu)建和繁殖
        1.3.2 基因組提取、擴(kuò)增和測序
        1.3.3 Real-time PCR檢測TauT-/-和TauT+/+大鼠腦組織中Slc6a6的表達(dá)
        1.3.4 Western blot技術(shù)檢測TauT-/-和TauT+/+大腦組織中TauT蛋白表達(dá)
        1.3.5 免疫組化檢測TauT-/-和TauT+/+大腦組織TauT蛋白的表達(dá)
    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 大鼠的構(gòu)建和繁殖情況
    2.2 基因型鑒定和測序結(jié)果
    2.3 Real-time PCR檢測TauT-/-和TauT+/+大鼠腦組織Slc6a6的表達(dá)
    2.4 Western blot技術(shù)檢測TauT-/-和TauT+/+大鼠腦組織TauT蛋白的表達(dá)
    2.5 TauT-/-和TauT+/+大鼠腦組織免疫組化結(jié)果
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]利用CRISPR/Cas9敲除大鼠胰島素受體底物1（Irs1）基因[J]. 馬元武,馬婧,路迎冬,陳煒,張旭,于磊,張連峰.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2014(03)
[2]基因工程大鼠研究進(jìn)展[J]. 王貴利,張連峰.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2013(03)
[3]牛磺酸研究進(jìn)展[J]. 白小瓊,孔德義.  中國食物與營養(yǎng). 2011(05)
[4]�；撬釋毙灾匦惋B腦創(chuàng)傷大鼠腦水腫的作用[J]. 張學(xué)斌,黃慧玲,常小麗,蔡英,姚鑫.  中華創(chuàng)傷雜志. 2010 (10)



本文編號：3660429