發(fā)布時間：2022-07-03 17:53

　　目的比較剛地弓形蟲重組蛋白表面抗原1 （rSAG1）與rSAG4單獨及聯(lián)合誘導昆明小鼠的免疫保護性作用,為研制復合型疫苗分子提供參考。方法以弓形蟲RH株基因組DNA為模板, PCR擴增SAG1和SAG4,構建重組質(zhì)粒pET-28a （+）-SAG1和pET-28a （+）-SAG4;經(jīng)雙酶切和測序鑒定后,將序列正確的重組質(zhì)粒轉入BL21 （DE3）中,挑選陽性菌落,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導表達,收集菌體,超聲裂菌。在變性條件下經(jīng)鎳離子親合層析柱純化目的蛋白,采用透析逐步降低尿素濃度的方法進行目的蛋白復性; 125只昆明小鼠按照隨機數(shù)字表法分為5組,每組25只,分別為r SAG1免疫組、 rSAG4免疫組、 rSAG1+rSAG4聯(lián)合免疫組、PBS對照組、 PBS+佐劑對照組,首次免疫為重組蛋白100μg/鼠,與等體積完全弗氏佐劑充分乳化后進行皮下多點注射,間隔2周加強免疫1次,連續(xù)2次,加強免疫時重組蛋白為50μg/鼠,與等體積弗氏不完全佐劑乳化,對照組小鼠注射等量PBS。各組小鼠于免疫前（0周）及首次免疫后第2、 4、 6周斷尾取血,分離血清,間接ELISA法檢測... 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 蟲株、質(zhì)粒、菌株和實驗動物來源
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 目的基因擴增
    1.4 pET-28a (+) -SAG1和pET-28a (+) -SAG4表達質(zhì)粒的構建
    1.5 rSAG1、rSAG4的表達純化
    1.6 rSAG1、rSAG4免疫小鼠
    1.7 ELISA測定小鼠血清IgG抗體
    1.8 攻擊感染實驗
    1.9 統(tǒng)計學分析
    1.1 0 倫理批準和患者知情同意
2 結果
    2.1 弓形蟲SAG1與SAG4基因的克隆、表達與純化
    2.2 ELISA檢測結果
    2.3 攻擊感染后生存時間比較
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]弓形蟲疫苗研究進展[J]. 蔣子陽,董鍇,戴紅,王夢秋,劉燦,陳建平.  熱帶醫(yī)學雜志. 2018(02)
[2]剛地弓形蟲表面抗原1、2 B細胞表位基因的融合表達和鑒定[J]. 王釗哲,許瑞,洪煬,林矯矯,陸珂,李浩,陳兆國,石耀軍,吳思敏,江嘉欣,李嘉靜,朱傳剛.  中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2017(06)
[3]《弓形蟲病的診斷》標準解讀[J]. 嚴曉嵐,聞禮永,官亞宜,張劍鋒,林丹丹.  中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2016(04)
[4]CD8+T細胞免疫應答在剛地弓形蟲感染免疫中的功能研究進展[J]. 吳斌,呂芳麗.  中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2014(02)
[5]弓形蟲主要抗原的研究進展[J]. 郭凱,陳興智.  蚌埠醫(yī)學院學報. 2012(04)
[6]弓形蟲表面抗原SAG1基因的克隆表達、純化與鑒定[J]. 楊雯,田春林,朱穗京,劉曉泉.  廣西醫(yī)科大學學報. 2010(02)
[7]弓形蟲表面抗原SAG4基因的克隆、表達和鑒定[J]. 楊雯,萬孝玲,田春林,王衛(wèi)群,劉曉泉.  中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2009(04)
[8]剛地弓形蟲ROP2-P30復合重組蛋白疫苗對BALB/c小鼠免疫保護性的研究（英文）[J]. 張佃波,周林濤,王海防,劉麗娟,陳錫欣,江洪濤,王用斌,劉克義.  中國病原生物學雜志. 2008(10)
[9]弓形蟲SAG1-SAG2復合DNA疫苗免疫小鼠誘導的免疫保護性[J]. 孫怡,何深一,叢華,楊婷婷,周懷瑜,古欽民,李瑛,趙群力.  國際醫(yī)學寄生蟲病雜志. 2006(01)
[10]全國人體重要寄生蟲病現(xiàn)狀調(diào)查報告[J]. 許隆祺,陳穎丹,孫鳳華,蔡黎,方悅怡,王麗萍,劉新,李莉莎,馮宇,李輝.  中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2005(S1)



本文編號：3655369