目的比較剛地弓形蟲重組蛋白表面抗原1 （rSAG1）與rSAG4單獨(dú)及聯(lián)合誘導(dǎo)昆明小鼠的免疫保護(hù)性作用,為研制復(fù)合型疫苗分子提供參考。方法以弓形蟲RH株基因組DNA為模板, PCR擴(kuò)增SAG1和SAG4,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a （+）-SAG1和pET-28a （+）-SAG4;經(jīng)雙酶切和測(cè)序鑒定后,將序列正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入BL21 （DE3）中,挑選陽(yáng)性菌落,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá),收集菌體,超聲裂菌。在變性條件下經(jīng)鎳離子親合層析柱純化目的蛋白,采用透析逐步降低尿素濃度的方法進(jìn)行目的蛋白復(fù)性; 125只昆明小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為5組,每組25只,分別為r SAG1免疫組、 rSAG4免疫組、 rSAG1+rSAG4聯(lián)合免疫組、PBS對(duì)照組、 PBS+佐劑對(duì)照組,首次免疫為重組蛋白100μg/鼠,與等體積完全弗氏佐劑充分乳化后進(jìn)行皮下多點(diǎn)注射,間隔2周加強(qiáng)免疫1次,連續(xù)2次,加強(qiáng)免疫時(shí)重組蛋白為50μg/鼠,與等體積弗氏不完全佐劑乳化,對(duì)照組小鼠注射等量PBS。各組小鼠于免疫前（0周）及首次免疫后第2、 4、 6周斷尾取血,分離血清,間接ELISA法檢測(cè)... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 蟲株、質(zhì)粒、菌株和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 目的基因擴(kuò)增
    1.4 pET-28a (+) -SAG1和pET-28a (+) -SAG4表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 rSAG1、rSAG4的表達(dá)純化
    1.6 rSAG1、rSAG4免疫小鼠
    1.7 ELISA測(cè)定小鼠血清IgG抗體
    1.8 攻擊感染實(shí)驗(yàn)
    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.1 0 倫理批準(zhǔn)和患者知情同意
2 結(jié)果
    2.1 弓形蟲SAG1與SAG4基因的克隆、表達(dá)與純化
    2.2 ELISA檢測(cè)結(jié)果
    2.3 攻擊感染后生存時(shí)間比較
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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