目的 構(gòu)建人源性噬菌體單鏈抗體庫，以篩選人源性抗乙型肝炎病毒表面抗原（抗HBs）的基因工程抗體。 方法 （1）抽取注射過乙肝疫苗并產(chǎn)生抗HBs抗體的正常人外周血，分離淋巴細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA （2）以O(shè)ligo（dT）₁₅為引物將mRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA （3）根據(jù)抗體分子的第一框架區(qū)和第四框架區(qū)的保守性，設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物 （4）PCR擴(kuò)增重鏈和輕鏈的可變區(qū)序列（V_H和V_L） （5）設(shè)計(jì)一對(duì)互為模板的引物，PCR擴(kuò)增連接肽Linker基因 （6）由Linker片段通過重疊延伸PCR連接擴(kuò)增的V_H和V_L基因，形成單鏈抗體（ScFv）基因 （7）將ScFv基因克隆入具有相同酶切位點(diǎn)的噬菌粒載體pCANTAB5E中，然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.Coli TG1，輔助噬菌體M13K07的拯救，收集噬菌體上清，即為噬菌體抗體庫 結(jié)果 （1） 我們?cè)O(shè)計(jì)的擴(kuò)增抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)的簡(jiǎn)并引物，成功地?cái)U(kuò)增出了V_H和V... 

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
一、 淋巴細(xì)胞的分離純化
二、 細(xì)胞總RNA的提取
三、 cDNA的合成
四、 PCR擴(kuò)增抗體可變區(qū)基因
五、 Linker連接片段的制備
六、 人單鏈Fv(ScFv)片段的組裝
七、 ScFv單鏈?zhǔn)删w抗體庫的構(gòu)建
八、 總結(jié)
正文參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3650877