目的：構(gòu)建表達(dá)人突變CD59（HMCD59）蛋白的重組真核表達(dá)載體，建立HMCD59真核表達(dá)系統(tǒng)，獲得表達(dá)HMCD59蛋白的中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO）細(xì)胞株，深入研究HMCD59在糖尿病血管增殖癥中的作用。為闡明糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)理奠定基礎(chǔ)。 方法：分別構(gòu)建兩種含有HMCD59全長CDNA序列的重組pALTER質(zhì)粒，并與pCDNA3質(zhì)粒，按3：1比例混合后，運(yùn)用脂質(zhì)體介導(dǎo)法共轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞（編號為HM5-CHO及HM6-CHO），用新霉素類似物G418初步篩選出陽性克隆。應(yīng)用熒光抗體技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、免疫酶標(biāo)技術(shù)、western-blot技術(shù)進(jìn)一步檢測HMCD59蛋白在真核細(xì)胞膜表面的表達(dá)；收集CHO細(xì)胞作為抗原，免疫家兔以獲得多克隆抗體，并通過BCECF染料釋放試驗(yàn)檢測HMCD59蛋白糖化前后的抗補(bǔ)體活性。 結(jié)果：1、成功構(gòu)建了表達(dá)HMCD59真核細(xì)胞（CHO）表達(dá)系統(tǒng)。運(yùn)用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將重組突變CD59-pALTER及pcDNA3共轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，用含有400ug／mlG418的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)2周，篩選出陽性克隆。篩選出的陽性克隆細(xì)胞以熒光抗體技術(shù)、免疫酶標(biāo)技... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
技術(shù)路線
結(jié)果
討論
結(jié)論與小結(jié)
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
綜述及參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]糖基化終產(chǎn)物對大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞sis基因表達(dá)的作用[J]. 劉乃豐,黃曉明,金暉,胡向陽,張麗容.  中國糖尿病雜志. 1997(04)



本文編號：3650055