目的：構建表達人突變CD59（HMCD59）蛋白的重組真核表達載體，建立HMCD59真核表達系統(tǒng)，獲得表達HMCD59蛋白的中國倉鼠卵巢細胞（CHO）細胞株，深入研究HMCD59在糖尿病血管增殖癥中的作用。為闡明糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)病機理奠定基礎。 方法：分別構建兩種含有HMCD59全長CDNA序列的重組pALTER質(zhì)粒，并與pCDNA3質(zhì)粒，按3：1比例混合后，運用脂質(zhì)體介導法共轉(zhuǎn)染CHO細胞（編號為HM5-CHO及HM6-CHO），用新霉素類似物G418初步篩選出陽性克隆。應用熒光抗體技術、流式細胞術、免疫酶標技術、western-blot技術進一步檢測HMCD59蛋白在真核細胞膜表面的表達；收集CHO細胞作為抗原，免疫家兔以獲得多克隆抗體，并通過BCECF染料釋放試驗檢測HMCD59蛋白糖化前后的抗補體活性。 結果：1、成功構建了表達HMCD59真核細胞（CHO）表達系統(tǒng)。運用脂質(zhì)體介導法將重組突變CD59-pALTER及pcDNA3共轉(zhuǎn)染CHO細胞，用含有400ug／mlG418的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)2周，篩選出陽性克隆。篩選出的陽性克隆細胞以熒光抗體技術、免疫酶標技... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
技術路線
結果
討論
結論與小結
附錄
參考文獻
致謝
綜述及參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]糖基化終產(chǎn)物對大鼠主動脈平滑肌細胞sis基因表達的作用[J]. 劉乃豐,黃曉明,金暉,胡向陽,張麗容.  中國糖尿病雜志. 1997(04)



本文編號：3650055