目的: 通過建立內(nèi)臟脂肪組織成纖維細(xì)胞系（visceral adipose fibroblast cell line,VAFC）以及對其基因表達(dá)特征和功能的研究,探討脂肪組織成纖維細(xì)胞在肥胖相關(guān)慢性炎癥中的作用:通過表達(dá)Pref-1-GST融合蛋白及制備C/EBPα,PPAR γ多克隆抗體,為探討Pref-1抑制脂肪細(xì)胞分化的作用機制作準(zhǔn)備。 方法: 1 通過組織塊培養(yǎng)法分離建立VAFC細(xì)胞系: 2 原子力顯微鏡（atomic force microscope,AFM）和透射電子顯微鏡（transmittion electronic microscope,TEM）分析VAFC細(xì)胞形態(tài)特征,染色體分析分析遺傳特征,RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)染色分析基因表達(dá)特征; 3 VAFC條件培養(yǎng)基（conditioned medium,CM）處理骨髓細(xì)胞（bone marrow cells, BMCs）,6天后通過酵母吞噬實驗,分析VAFC CM對巨噬細(xì)胞發(fā)育的影響; 4 在無血清條件下,VAFC CM處理BMCs,24 h后用PE-膜聯(lián)蛋白-V（Annexin-... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
    Results
第一部分 小鼠內(nèi)臟脂肪組織成纖維細(xì)胞系的建立
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要材料
        2.2 主要儀器
        2.3 VAFC細(xì)胞系建立
        2.4 原子力顯微鏡(AFM)觀察
        2.5 透射電子顯微鏡(TEM)觀察
        2.6 生長特性和染色體分析
        2.7 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)
        2.8 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色分析
        2.9 VAFC條件培養(yǎng)基(VAFC CM)
        2.10 吞噬試驗
        2.11 VAFC CM對 BMCs凋亡的影響
        2.12 VAFC CM對淋巴細(xì)胞增殖的影響
        2.13 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 結(jié)果與分析
        3.1 建立VAFC細(xì)胞系
        3.2 形態(tài)學(xué)分析
        3.3 生長特征和染色體分析
        3.4 基因表達(dá)分析
        3.5 VAFC CM對巨噬細(xì)胞發(fā)育的影響
        3.6 VAFC CM對 BMCs凋亡的影響
        3.7 VAFC CM對淋巴細(xì)胞增殖的影響
    4 討論
第二部分 小鼠 C/EBPAА，PPARG和PREF-1原核表達(dá)以及多克隆抗體制備
    1 前言
        1.1 肥胖
        1.2 脂肪細(xì)胞分化與發(fā)育
        1.3 脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控因素
        1.4 C/EBP家族
        1.5 PPAR家族
        1.6 Preadipocyte factor-1(pref-1)
    2 材料與方法
        2.1 主要材料和試劑
        2.2 總 RNA抽提
        2.3 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)
        2.4 構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒
        2.5 融合蛋白表達(dá)，純化及鑒定
        2.6 抗血清制備及鑒定
    3 結(jié)果與分析
        3.1 RT-PCR擴增C/EBPα，PPARγ和 Pref-1 cDNA片段
        3.2 菌落 PCR鑒定重組質(zhì)粒
        3.3 重組質(zhì)粒 DNA序列測定
        3.4 融合蛋白表達(dá)，純化及鑒定
        3.5 抗血清鑒定
    4 討論
參考文獻(xiàn)
總結(jié)
論文發(fā)表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脂肪細(xì)胞的分化調(diào)控[J]. 周麗斌.  國外醫(yī)學(xué).內(nèi)分泌學(xué)分冊. 2001(04)



本文編號：3630946