目的 克隆小鼠M-CSF基因開放閱讀框全長序列552個(gè)氨基酸，并在真核細(xì)胞中表達(dá)。方法 （1）提取L929細(xì)胞總RNA，RT-PCR擴(kuò)增M-CSF基因，產(chǎn)物與pGEM-T Easy質(zhì)粒連接，轉(zhuǎn)化后酶切鑒定，DNA序列分析。（2）將M-CSF基因重組體亞克隆入真核表達(dá)載體pEGFP-N3，轉(zhuǎn)化后酶切鑒定。（3）將重組體pEGFP-N3-M-CSF質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞綠色熒光產(chǎn)生情況。收獲轉(zhuǎn)染后細(xì)胞,提取總RNA，進(jìn)行RT-PCR，熒光定量PCR檢測，用Excel軟件對熒光定量PCR結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果 （1）電泳結(jié)果顯示RT-PCR產(chǎn)物的長度為1690bp，與預(yù)期結(jié)果相符。產(chǎn)物純化、連接、轉(zhuǎn)化后酶切結(jié)果提示獲取了小鼠M-CSF基因重組質(zhì)粒pGEM-T Easy-M-CSFa。為了測通插入片段的全序列，采用亞克隆的方法，得到五個(gè)陽性重組體EH、EB、SB、SH、SG，測序發(fā)現(xiàn)在重組體pGEM-T Easy-M-CSFb第9位缺失了一個(gè)G堿基，引起閱讀框的錯(cuò)誤，在第1093位發(fā)生了堿基顛換，由A變成G，其編碼的氨基酸由蘇氨酸變成丙氨酸。為了修復(fù)突變位點(diǎn)，從... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
論 文
    前 言
    材料與方法
    結(jié) 果
    討 論
    結(jié) 論
    參考文獻(xiàn)
    附 錄
綜 述
    正 文
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡介
致 謝



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