利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)使單純皰疹病毒1型（herpes simplex virus type 1,HSV-1）ul7、ul41、LAT基因缺失構(gòu)建M3減毒株（M3株）,在M3株基礎上通過缺失us3得到M4突變株（M4株）。本研究旨在分析野毒株（McKrae株）、M3株與M4株在毒力和抗細胞凋亡方面的差異。結(jié)果表明,McKrae組出現(xiàn)明顯的臨床癥狀,且100%死亡（P<0.001）,而M3、M4組未出現(xiàn)臨床癥狀。M4組小鼠組織中病毒載量明顯低于McKrae組和M3組;病理學檢測表明,McKrae組出現(xiàn)蛛網(wǎng)膜出血、膠質(zhì)小結(jié)等現(xiàn)象,而M3、M4組未見病理損傷,M4組炎性因子表達與McKrae、M3組相比也顯著下降（P<0.01）;免疫后M4組較M3組出現(xiàn)高水平的中和抗體、γ干擾素（interferonγ,IFN-γ）和白細胞介素4（interleukin 4,IL-4）抗原特異性T細胞;McKrae株再次感染時,M4組小鼠組織中病毒載量明顯低于對照組和M3組;在人急性T細胞淋巴瘤細胞中,M4株相比McKrae株和M3株可明顯誘導細胞凋亡。 

【文章來源】：微生物與感染. 2019,14(03)

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗動物
    1.2 毒株及細胞
    1.3 主要試劑
    1.4 增殖動力學實驗
    1.5 HSV-1感染小鼠及各項指標檢測
        1.5.1 分組
        1.5.2 臨床癥狀觀察
        1.5.3 組織病理檢測
        1.5.4 組織病毒載量檢測
        1.5.5 細胞因子表達分析
        1.5.6 T細胞功能分析
        1.5.7 中和抗體效價檢測
        1.5.8 細胞凋亡測定
    1.6 統(tǒng)計分析
2 結(jié)果
    2.1 M4株的鑒定及 M3、M4株細胞水平的增殖動力學分析
    2.2 M3和M4株感染BALB/c小鼠均無臨床癥狀
    2.3 us3基因突變可下調(diào)M4株在小鼠主要器官中的增殖
    2.4 us3基因突變保持了M3株的減毒特征
    2.5 us3基因突變下調(diào)機體炎癥反應
    2.6 M3、M4株誘導的免疫反應
    2.7 M4株有更強的抑制體內(nèi)病毒增殖的能力
    2.8 us3基因功能性抑制可增強M4株誘導的體外細胞凋亡
3 討論



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