本文關(guān)鍵詞：衰老對(duì)小鼠B淋巴細(xì)胞脂筏結(jié)構(gòu)和功能的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的:脂筏是膜脂雙層內(nèi)富含膽固醇和鞘脂的微區(qū),目前公認(rèn)的脂筏功能是參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用以及膽固醇代謝運(yùn)輸?shù)�。近年來的研究發(fā)現(xiàn)脂筏參與了B淋巴細(xì)胞的成熟和活化過程,本文通過觀察比較年輕小鼠和年老小鼠B細(xì)胞表面脂筏的表達(dá)情況,探索衰老對(duì)B細(xì)胞脂筏結(jié)構(gòu)和功能的影響;并研究了體外純化培養(yǎng)B淋巴細(xì)胞的適宜條件。方法:1將2-4月齡BALB/c小鼠隨機(jī)分為正常年輕鼠組和高膽固醇年輕鼠組,18-24月齡BALB/c小鼠隨機(jī)分為正常年老鼠組和高膽固醇年老鼠組。高膽固醇年輕鼠組和高膽固醇年老鼠組喂食高膽固醇飼料。正常年輕組和年老組小鼠給予正常飲食。2取小鼠脾臟制成單細(xì)胞懸液,染色后以流式細(xì)胞儀檢測(cè)B淋巴細(xì)胞數(shù)目及亞群的變化、脂筏的表達(dá)情況、Ca2+變化水平。3用綿羊紅細(xì)胞對(duì)四組小鼠進(jìn)行體內(nèi)免疫,以ELISA法檢測(cè)B細(xì)胞分泌抗體情況及血清膽固醇水平。4體外分離培養(yǎng)小鼠脾臟細(xì)胞,隨機(jī)分為7組,分別用白細(xì)胞介素4,CD3,脂多糖,白細(xì)胞介素4+CD3,白細(xì)胞介素4+脂多糖,CD3+脂多糖組進(jìn)行干預(yù)、將未給予刺激的脾細(xì)胞作為對(duì)照組。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)在不同培養(yǎng)條件下小鼠脾臟細(xì)胞T、B淋巴細(xì)胞及其亞群的變化結(jié)果:1、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果:⑴衰老對(duì)B淋巴細(xì)胞亞群的影響:與年輕鼠組比較,年老鼠組總外周B細(xì)胞數(shù)目保持不變;過渡(transitional,TR)B細(xì)胞亞群的T1亞群和T2亞群數(shù)目比例均顯著減少(P0.01),T3亞群數(shù)目比例增加(P0.01);B1細(xì)胞和濾泡(follicular,FO)B細(xì)胞數(shù)目比例并沒有明顯改變(P0.05),邊緣帶(marginal zone,MZ)B細(xì)胞數(shù)目比例下降(P0.01)。⑵衰老對(duì)B細(xì)胞膜上脂筏表達(dá)的影響:與年輕鼠組比較,膽固醇在年老鼠組的T1、T2亞群表達(dá)顯著增加(P0.0001),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而在T3亞群膽固醇的表達(dá)卻顯著降低(P0.0001),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;B1亞群的膽固醇表達(dá)增加(P0.001);FO亞群膽固醇的表達(dá)無明顯差異(P0.05);MZ亞群膽固醇的表達(dá)明顯減少(P0.0001),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而GM1的表達(dá)卻有所不同,由實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析知100%的B220+B細(xì)胞均表達(dá)GM1。與年輕鼠組相比,GM1在年老鼠組TR、B1、FO、MZ亞群中的表達(dá)均顯著降低(P0.0001),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑶衰老影響B(tài)細(xì)胞膜上Ca2+內(nèi)流水平:與年輕鼠組比較,年老鼠組Ca2+內(nèi)流水平降低。2、ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果⑴衰老對(duì)血清中膽固醇水平的影響:與年輕鼠組相比,年老鼠組和高膽固醇年輕鼠組的血清膽固醇水平明顯升高(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而年老鼠組的血清膽固醇水平與高膽固醇年老鼠組相比,未見明顯差異(P0.05);高膽固醇年輕鼠組與高膽固醇年老鼠組的血清膽固醇水平無明顯差異(P0.05)。⑵衰老對(duì)血清中抗體水平的影響:與年輕鼠組相比,年老鼠組的IgM效價(jià)顯著升高,而IgG的效價(jià)卻明顯降低;高膽固醇年輕鼠組IgM的效價(jià)沒有顯著差異,而IgG的效價(jià)增高,但分泌高峰期卻延后。3、體外培養(yǎng)脾臟細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與對(duì)照組比較,白細(xì)胞介素4組淋巴細(xì)胞在培養(yǎng)后第3-5天數(shù)量達(dá)到高峰;脂多糖組在培養(yǎng)初期無明顯作用,第3天開始淋巴細(xì)胞數(shù)量有明顯的增加,第5天達(dá)到高峰;培養(yǎng)體系中加入CD3單克隆抗體,可導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞消失,培養(yǎng)2 d后,可得到較為單一的B淋巴細(xì)胞,其細(xì)胞數(shù)量在第3天達(dá)到高峰。其中B220+IgD+成熟B淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量顯著增加。體外培養(yǎng)24 h后,各組B220+CD93+Transitional B淋巴細(xì)胞亞群均完全消失。結(jié)論:衰老使小鼠B淋巴細(xì)胞脂筏結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,導(dǎo)致脂筏信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能受限;體外培養(yǎng)的小鼠脾臟細(xì)胞加入CD3單克隆抗體和白細(xì)胞介素4可以去除T淋巴細(xì)胞,并維持成熟B淋巴細(xì)胞的生存和增殖。
【關(guān)鍵詞】：衰老 B淋巴細(xì)胞 脂筏 抗體 流式細(xì)胞術(shù) 培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R339.38
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、衰老對(duì)B淋巴細(xì)胞脂筏結(jié)構(gòu)影響14-21
• 1.1 對(duì)象和方法14-16
• 1.1.1 材料14-15
• 1.1.2 方法15
• 1.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理15-16
• 1.2 結(jié)果16-18
• 1.2.1 流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-18
• 1.3 討論18-20
• 1.3.1 衰老與B淋巴細(xì)胞亞群18-19
• 1.3.2 脂筏與年老小鼠B淋巴細(xì)胞亞群19-20
• 1.4 小結(jié)20-21
• 二、衰老對(duì)B淋巴細(xì)胞脂筏功能的影響21-30
• 2.1 對(duì)象和方法21-23
• 2.1.1 材料21-22
• 2.1.2 方法22-23
• 2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理23
• 2.2 結(jié)果23-26
• 2.2.1 ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-25
• 2.2.2 Ca~(2+)內(nèi)流實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-26
• 2.3 討論26-28
• 2.3.1 衰老對(duì)B淋巴細(xì)胞功能的影響26-27
• 2.3.2 衰老與血清膽固醇27
• 2.3.3 衰老與B淋巴細(xì)胞、脂筏、Ca~(2+)內(nèi)流27-28
• 2.4 小結(jié)28-30
• 三、體外純化培養(yǎng)小鼠脾臟B淋巴細(xì)胞30-38
• 3.1 對(duì)象和方法30-32
• 3.1.1 材料30-31
• 3.1.2 方法31
• 3.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理31-32
• 3.2 結(jié)果32-36
• 3.2.1 小鼠淋巴細(xì)胞數(shù)目變化32-33
• 3.2.2 小鼠脾臟B細(xì)胞亞群的變化33-36
• 3.3 討論36-37
• 3.4 小結(jié)37-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明44-45
• 綜述 衰老對(duì)B淋巴細(xì)胞的影響45-59
• 綜述參考文獻(xiàn)54-59
• 致謝59

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 田芳;胡雪莉;魏慧;劉浩;陳瑾;錢莉;楊維平;;日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原對(duì)B細(xì)胞的活化作用及其機(jī)制的初步研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年11期

2 周春雷;;miR-155通過調(diào)控Smad2的表達(dá)抑制TGF-β的活性[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2013年12期

3 鄭永威;袁榴娣;;肝素誘導(dǎo)性血小板減少癥的研究進(jìn)展[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年06期

4 王萬鵬;倪兆慧;;MicroRNA在狼瘡性腎炎免疫發(fā)病機(jī)制中的新認(rèn)識(shí)[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2015年04期

5 ZHAO LiDan;YE YanXia;ZHANG Xuan;;B cells biology in systemic lupus erythematosus—from bench to bedside[J];Science China(Life Sciences);2015年11期

6 孫

本文編號(hào)：355766