結(jié)核桿菌是結(jié)核病的病原菌。結(jié)核桿菌侵入機(jī)體進(jìn)行繁殖，釋放大量抗原尤其是蛋白抗原，選擇性刺激B細(xì)胞叢產(chǎn)生大量免疫球蛋白，急性早期階段以IgA、 IgM升高為主，此后IgG水平逐漸升高，升高的程度與病情輕重相關(guān)[1]。因此，檢測(cè)體液中的抗結(jié)核抗體對(duì)結(jié)核病的診斷有重要的輔助作用。引起免疫反應(yīng)的結(jié)核抗原多而復(fù)雜，為了尋找敏感性高特異性強(qiáng)的結(jié)核抗原，本實(shí)驗(yàn)利用基因工程技術(shù)重組結(jié)核分枝桿菌蛋白抗原，從結(jié)核分枝桿菌中提取菌體蛋白和脂多糖抗原，并對(duì)這些抗原進(jìn)行抗原性分析。首先，從結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv中提取DNA作為模板，根據(jù)GenBank提供的蛋白基因序列設(shè)計(jì)引物，通過PCR法克隆38KDa和14KDa蛋白基因，利用表達(dá)載體PET-30a（＋）和PET-22b（＋）分別以包涵體和可溶性蛋白的形式表達(dá)該蛋白，再利用離子親和層析方法對(duì)蛋白進(jìn)行純化，獲得高純度的目的蛋白，經(jīng)Western Blot檢測(cè)表明兩種重組蛋白都具有良好的抗原性。其次，為了獲得結(jié)核桿菌菌體蛋白和脂多糖抗原，利用改良的液體蘇通培養(yǎng)基培養(yǎng)大量的結(jié)核分枝桿菌，收集菌體，冰浴超聲破<WP=7>碎，用酚/氯仿抽提提取菌體蛋白... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮寫詞表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 結(jié)核分枝桿菌特異性蛋白抗原的基因克隆、表達(dá)及純化
第二部分 結(jié)核分枝桿菌脂多糖和菌體蛋白的制備
第三部分 結(jié)核分枝桿菌特異性抗原的抗原性分析
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]結(jié)核分支桿菌重組38000蛋白的免疫原性特征[J]. 何秀云,莊玉輝,張曉剛,熊志紅,董蒽軍,史迎昌,昌增益.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2000(08)



本文編號(hào)：3547412