支原體巨噬細胞活化脂肽-2經Btk/PI3K/Nrf2通路誘導單核細胞表達HO-1
發(fā)布時間：2021-12-02 19:02
目的觀察支原體巨噬細胞活化脂肽2（macrophage-activating lipopeptide-2,MALP-2）誘導人單核細胞系THP-1表達血紅素氧合酶-1（hemeoxygenase,HO-1）的分子機制。方法體外培養(yǎng)THP-1細胞,用5 ng/ml的MALP-2刺激12 h。Real-time PCR檢測HO-1 mRNA的表達,Western blot檢測其蛋白水平及Akt磷酸化;THP-1細胞與不同濃度的Bruton’酪氨酸激酶（Bruton’s tyrosine kinase,Btk）抑制劑LFM-A13作用1 h,隨后用MALP-2刺激12 h,Western blot觀察其對HO-1表達以及Akt磷酸化的影響;分別采用EMSA和免疫熒光檢測核轉錄因子Nrf2的DNA結合活性和核轉位,并觀察PI3K抑制劑LY294002對Nrf2的激活和DNA結合活性的改變情況;siRNA干擾Nrf2表達,以證實其在HO-1表達中的作用;最后,采用LFM-A13和血紅素處理THP-1細胞,MTT法檢測細胞的存活率。結果 MALP-2處理可顯著誘導THP-1細胞表達HO-1蛋白和m...
【文章來源】：免疫學雜志. 2014,30(08)北大核心CSCD
【文章頁數】：4 頁
【部分圖文】：
MALP-2經Btk誘導PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2
胞活性降低至37%。若同時加入HO-1激動劑CoPP以誘導HO-1表達，細胞活性增高至56%（圖5）。3討論本研究采用的MALP-2是根據發(fā)酵支原體細胞膜脂蛋白結構特征人工合成的一種脂肽，它具有幾乎所有支原體膜脂蛋白的免疫刺激活性（類似于LPS），且能被單核、巨噬細胞TLR2和TLR6受體識別[8-9]。由于是人工合成的脂肽，最主要的優(yōu)勢是避免了膜脂蛋白提取過程中內毒素污染的可能，因此在研究支原體感染過程中被廣泛采用[10]。圖3MALP-2經Btk誘導PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2administration圖1Btk特異性抑制劑降低MALP-2誘導THP-1細胞表達HO-1Fig1BtkspecificinhibitordecreasesMALP-2-inductedHO-1expressioninTHP-1cells圖2LFM-A13抑制THP-1細胞HO-1mRNA表達Fig2LFM-A13inhibitsHO-1mRNAexpressioninTHP-1cellsa)MALP-2inducesnucleartranslocationofNrf2viaPI3K(×40).b)MALP-2increasetheDNA-bindingactivityofNrf2byPI3Kactivation:1)control;2-5)MALP-2stimulatedfor0,30,60and120min;6)unlabeledNrf2probe;7)NF-κBprobe;8)Nrf2antibody;9)25μmol/LLY294002.c)SilencingofNrf2abrogatesHO-1expression.圖4PI3K-Nrf2參與調控MALP-2誘導HO-1表達Fig4PI3K-Nrf2pathwayinvolvesinMALP-2-inducedHO-1expression圖5LFM-A13增強THP-1細胞對血紅素的敏感性Fig5LFM-A13increasesthesensitivityofTHP-1cellstoheme·679·
?膜脂蛋白結構特征人工合成的一種脂肽，它具有幾乎所有支原體膜脂蛋白的免疫刺激活性（類似于LPS），且能被單核、巨噬細胞TLR2和TLR6受體識別[8-9]。由于是人工合成的脂肽，最主要的優(yōu)勢是避免了膜脂蛋白提取過程中內毒素污染的可能，因此在研究支原體感染過程中被廣泛采用[10]。圖3MALP-2經Btk誘導PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2administration圖1Btk特異性抑制劑降低MALP-2誘導THP-1細胞表達HO-1Fig1BtkspecificinhibitordecreasesMALP-2-inductedHO-1expressioninTHP-1cells圖2LFM-A13抑制THP-1細胞HO-1mRNA表達Fig2LFM-A13inhibitsHO-1mRNAexpressioninTHP-1cellsa)MALP-2inducesnucleartranslocationofNrf2viaPI3K(×40).b)MALP-2increasetheDNA-bindingactivityofNrf2byPI3Kactivation:1)control;2-5)MALP-2stimulatedfor0,30,60and120min;6)unlabeledNrf2probe;7)NF-κBprobe;8)Nrf2antibody;9)25μmol/LLY294002.c)SilencingofNrf2abrogatesHO-1expression.圖4PI3K-Nrf2參與調控MALP-2誘導HO-1表達Fig4PI3K-Nrf2pathwayinvolvesinMALP-2-inducedHO-1expression圖5LFM-A13增強THP-1細胞對血紅素的敏感性Fig5LFM-A13increasesthesensitivityofTHP-1cellstoheme·679·
本文編號：3529008
【文章來源】：免疫學雜志. 2014,30(08)北大核心CSCD
【文章頁數】：4 頁
【部分圖文】：
MALP-2經Btk誘導PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2
胞活性降低至37%。若同時加入HO-1激動劑CoPP以誘導HO-1表達，細胞活性增高至56%（圖5）。3討論本研究采用的MALP-2是根據發(fā)酵支原體細胞膜脂蛋白結構特征人工合成的一種脂肽，它具有幾乎所有支原體膜脂蛋白的免疫刺激活性（類似于LPS），且能被單核、巨噬細胞TLR2和TLR6受體識別[8-9]。由于是人工合成的脂肽，最主要的優(yōu)勢是避免了膜脂蛋白提取過程中內毒素污染的可能，因此在研究支原體感染過程中被廣泛采用[10]。圖3MALP-2經Btk誘導PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2administration圖1Btk特異性抑制劑降低MALP-2誘導THP-1細胞表達HO-1Fig1BtkspecificinhibitordecreasesMALP-2-inductedHO-1expressioninTHP-1cells圖2LFM-A13抑制THP-1細胞HO-1mRNA表達Fig2LFM-A13inhibitsHO-1mRNAexpressioninTHP-1cellsa)MALP-2inducesnucleartranslocationofNrf2viaPI3K(×40).b)MALP-2increasetheDNA-bindingactivityofNrf2byPI3Kactivation:1)control;2-5)MALP-2stimulatedfor0,30,60and120min;6)unlabeledNrf2probe;7)NF-κBprobe;8)Nrf2antibody;9)25μmol/LLY294002.c)SilencingofNrf2abrogatesHO-1expression.圖4PI3K-Nrf2參與調控MALP-2誘導HO-1表達Fig4PI3K-Nrf2pathwayinvolvesinMALP-2-inducedHO-1expression圖5LFM-A13增強THP-1細胞對血紅素的敏感性Fig5LFM-A13increasesthesensitivityofTHP-1cellstoheme·679·
?膜脂蛋白結構特征人工合成的一種脂肽，它具有幾乎所有支原體膜脂蛋白的免疫刺激活性（類似于LPS），且能被單核、巨噬細胞TLR2和TLR6受體識別[8-9]。由于是人工合成的脂肽，最主要的優(yōu)勢是避免了膜脂蛋白提取過程中內毒素污染的可能，因此在研究支原體感染過程中被廣泛采用[10]。圖3MALP-2經Btk誘導PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2administration圖1Btk特異性抑制劑降低MALP-2誘導THP-1細胞表達HO-1Fig1BtkspecificinhibitordecreasesMALP-2-inductedHO-1expressioninTHP-1cells圖2LFM-A13抑制THP-1細胞HO-1mRNA表達Fig2LFM-A13inhibitsHO-1mRNAexpressioninTHP-1cellsa)MALP-2inducesnucleartranslocationofNrf2viaPI3K(×40).b)MALP-2increasetheDNA-bindingactivityofNrf2byPI3Kactivation:1)control;2-5)MALP-2stimulatedfor0,30,60and120min;6)unlabeledNrf2probe;7)NF-κBprobe;8)Nrf2antibody;9)25μmol/LLY294002.c)SilencingofNrf2abrogatesHO-1expression.圖4PI3K-Nrf2參與調控MALP-2誘導HO-1表達Fig4PI3K-Nrf2pathwayinvolvesinMALP-2-inducedHO-1expression圖5LFM-A13增強THP-1細胞對血紅素的敏感性Fig5LFM-A13increasesthesensitivityofTHP-1cellstoheme·679·
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