目的觀察支原體巨噬細(xì)胞活化脂肽2（macrophage-activating lipopeptide-2,MALP-2）誘導(dǎo)人單核細(xì)胞系THP-1表達(dá)血紅素氧合酶-1（hemeoxygenase,HO-1）的分子機(jī)制。方法體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞,用5 ng/ml的MALP-2刺激12 h。Real-time PCR檢測(cè)HO-1 mRNA的表達(dá),Western blot檢測(cè)其蛋白水平及Akt磷酸化;THP-1細(xì)胞與不同濃度的Bruton’酪氨酸激酶（Bruton’s tyrosine kinase,Btk）抑制劑LFM-A13作用1 h,隨后用MALP-2刺激12 h,Western blot觀察其對(duì)HO-1表達(dá)以及Akt磷酸化的影響;分別采用EMSA和免疫熒光檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2的DNA結(jié)合活性和核轉(zhuǎn)位,并觀察PI3K抑制劑LY294002對(duì)Nrf2的激活和DNA結(jié)合活性的改變情況;siRNA干擾Nrf2表達(dá),以證實(shí)其在HO-1表達(dá)中的作用;最后,采用LFM-A13和血紅素處理THP-1細(xì)胞,MTT法檢測(cè)細(xì)胞的存活率。結(jié)果 MALP-2處理可顯著誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)HO-1蛋白和m... 

【文章來源】：免疫學(xué)雜志. 2014,30(08)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

MALP-2經(jīng)Btk誘導(dǎo)PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2

胞活性降低至37%。若同時(shí)加入HO-1激動(dòng)劑CoPP以誘導(dǎo)HO-1表達(dá)，細(xì)胞活性增高至56%（圖5）。3討論本研究采用的MALP-2是根據(jù)發(fā)酵支原體細(xì)胞膜脂蛋白結(jié)構(gòu)特征人工合成的一種脂肽，它具有幾乎所有支原體膜脂蛋白的免疫刺激活性（類似于LPS），且能被單核、巨噬細(xì)胞TLR2和TLR6受體識(shí)別[8-9]。由于是人工合成的脂肽，最主要的優(yōu)勢(shì)是避免了膜脂蛋白提取過程中內(nèi)毒素污染的可能，因此在研究支原體感染過程中被廣泛采用[10]。圖3MALP-2經(jīng)Btk誘導(dǎo)PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2administration圖1Btk特異性抑制劑降低MALP-2誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)HO-1Fig1BtkspecificinhibitordecreasesMALP-2-inductedHO-1expressioninTHP-1cells圖2LFM-A13抑制THP-1細(xì)胞HO-1mRNA表達(dá)Fig2LFM-A13inhibitsHO-1mRNAexpressioninTHP-1cellsa)MALP-2inducesnucleartranslocationofNrf2viaPI3K(×40).b)MALP-2increasetheDNA-bindingactivityofNrf2byPI3Kactivation:1)control;2-5)MALP-2stimulatedfor0,30,60and120min;6)unlabeledNrf2probe;7)NF-κBprobe;8)Nrf2antibody;9)25μmol/LLY294002.c)SilencingofNrf2abrogatesHO-1expression.圖4PI3K-Nrf2參與調(diào)控MALP-2誘導(dǎo)HO-1表達(dá)Fig4PI3K-Nrf2pathwayinvolvesinMALP-2-inducedHO-1expression圖5LFM-A13增強(qiáng)THP-1細(xì)胞對(duì)血紅素的敏感性Fig5LFM-A13increasesthesensitivityofTHP-1cellstoheme·679·

?膜脂蛋白結(jié)構(gòu)特征人工合成的一種脂肽，它具有幾乎所有支原體膜脂蛋白的免疫刺激活性（類似于LPS），且能被單核、巨噬細(xì)胞TLR2和TLR6受體識(shí)別[8-9]。由于是人工合成的脂肽，最主要的優(yōu)勢(shì)是避免了膜脂蛋白提取過程中內(nèi)毒素污染的可能，因此在研究支原體感染過程中被廣泛采用[10]。圖3MALP-2經(jīng)Btk誘導(dǎo)PI3K激活Fig3BtkinvolvesinPI3KactivationafterMALP-2administration圖1Btk特異性抑制劑降低MALP-2誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)HO-1Fig1BtkspecificinhibitordecreasesMALP-2-inductedHO-1expressioninTHP-1cells圖2LFM-A13抑制THP-1細(xì)胞HO-1mRNA表達(dá)Fig2LFM-A13inhibitsHO-1mRNAexpressioninTHP-1cellsa)MALP-2inducesnucleartranslocationofNrf2viaPI3K(×40).b)MALP-2increasetheDNA-bindingactivityofNrf2byPI3Kactivation:1)control;2-5)MALP-2stimulatedfor0,30,60and120min;6)unlabeledNrf2probe;7)NF-κBprobe;8)Nrf2antibody;9)25μmol/LLY294002.c)SilencingofNrf2abrogatesHO-1expression.圖4PI3K-Nrf2參與調(diào)控MALP-2誘導(dǎo)HO-1表達(dá)Fig4PI3K-Nrf2pathwayinvolvesinMALP-2-inducedHO-1expression圖5LFM-A13增強(qiáng)THP-1細(xì)胞對(duì)血紅素的敏感性Fig5LFM-A13increasesthesensitivityofTHP-1cellstoheme·679·


本文編號(hào)：3529008