人羊膜上皮細(xì)胞由外胚層發(fā)育而來,屬于成體干細(xì)胞,具有來源廣泛、免疫原性低、非致瘤性、不存在醫(yī)學(xué)倫理道德限制等優(yōu)點.研究目的:建立人羊膜上皮細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)的方法,檢測其向三胚層誘導(dǎo)分化培養(yǎng)潛能.在無菌條件下機(jī)械分離羊膜,使用胰蛋白酶分步消化法收集人羊膜上皮細(xì)胞,體外培養(yǎng),觀察其細(xì)胞形態(tài)與生長規(guī)律;并通過免疫細(xì)胞化學(xué)法,RTPCR及三胚層定向誘導(dǎo)等方法對其進(jìn)行鑒定.結(jié)果:成功從人羊膜中分離得到純度較高的人羊膜上皮細(xì)胞.免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定結(jié)果顯示,分離到的羊膜上皮細(xì)胞內(nèi)的角蛋白19呈陽性;RT-PCR鑒定干細(xì)胞標(biāo)志基因REX1、Oct-4和Nanog,在mRNA水平均有表達(dá);定向誘導(dǎo)條件下,人羊膜上皮細(xì)胞可向成脂、成神經(jīng)和成肝樣細(xì)胞分化.結(jié)論:人羊膜上皮細(xì)胞可在體外分離培養(yǎng),具有干細(xì)胞特性,可以定向誘導(dǎo)分化成內(nèi)胚層、中胚層、和三胚層三個胚層組織與細(xì)胞. 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2019,50(02)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
引言
1 材料與方法
    1.1 實驗材料與試劑
        1.1.1 實驗材料
        1.1.2 實驗試劑
    1.2 實驗方法
        1.2.1 人羊膜上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        1.2.2 人羊膜上皮細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        1.2.3 人羊膜上皮細(xì)胞的生長曲線測定
        1.2.4 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測細(xì)胞內(nèi)角蛋白19
        1.2.5 人羊膜上皮細(xì)胞向成脂細(xì)胞誘導(dǎo)分化及鑒定
        1.2.6 人羊膜上皮細(xì)胞向成神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化及鑒定培養(yǎng)
        1.2.7 人羊膜上皮細(xì)胞向成肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化及鑒定
        1.2.8 RT-PCR檢測干細(xì)胞標(biāo)志基因的表達(dá)情況
2 實驗結(jié)果與分析
    2.1 人羊膜上皮細(xì)胞的形態(tài)觀察
    2.2 人羊膜上皮細(xì)胞的生長曲線
    2.3 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測角蛋白19 (CK19) 的表達(dá)
    2.4 RT-PCR檢測干性基因Oct-4、Nanog和REX1的mRNA水平的表達(dá)情況
    2.5 人羊膜上皮細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化及鑒定
    2.6 人羊膜上皮細(xì)胞成神經(jīng)誘導(dǎo)分化及鑒定
    2.7 人羊膜上皮細(xì)胞成肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化及鑒定
3 討論
    3.1 人羊膜上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)
    3.2 人羊膜上皮細(xì)胞的生物學(xué)特性
    3.3 人羊膜上皮細(xì)胞的多向分化潛能
4 結(jié)論



本文編號：3528277