【目的】從正常人肝組織中克隆nm23-H1cDNA基因，構建腺病毒載體，為研究nm23-H1的生物學活性、突變特性及腫瘤基因治療打下實驗基礎。 【方法】應用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈式反應（RT-PCR）技術，從正常人肝組織中擴增出nm23-H1cDNA，并將其連接到質(zhì)粒pMD18-T上，經(jīng)酶切鑒定、核苷酸序列測定，設計突變引物，進行PCR重疊延伸點誘導突變，克隆基因序列在Genbank上比較。與腺病毒穿梭質(zhì)粒正向連接，構建腺病毒載體。 【結果】在正常人肝組織中克隆得到的nm23-H1cDNA片段經(jīng)測序、比較，發(fā)現(xiàn)兩個核苷酸與已知基因序列不同：213位胞嘧啶突變?yōu)樾叵汆奏ぃ?13C→T），217位胞嘧啶突變?yōu)樾叵汆奏ぃ?17C→T）。對應氨基酸發(fā)生突變：71位G甘氨酸變?yōu)锳丙氨酸，73位的V纈氨酸變?yōu)镮異亮氨酸。作PCR重疊延伸點誘導突變，克隆的基因經(jīng)測序鑒定，與已知nm23-H1cDNA編碼區(qū)基因100％符合，以此基因成功構建正向腺病毒穿梭質(zhì)粒載體。 【結論】1．成功克隆出中國人nm23-H1cDNA基因，測序結果在基因庫中比較，有兩個核苷酸不同，無類似報道。2．采用PCR重疊... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學云南省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
一、 論文 Nm23-H1cDNA片段克隆及腺病毒載體的構建
    (一) 中文摘要
    (二) 英文摘要
    (三) 正文
        1 前言
        2 材料和方法
        3 結果
        4 討論
        5 結論
        6 參考文獻
    (四) 中文詳細摘要
    (五) 英文詳細摘要
二、 綜述
三、 致謝
四、 發(fā)表文章目錄


【參考文獻】：
期刊論文
[1]nm23-h1基因?qū)雽ο贅幽倚园┓只挠绊慬J]. 溫玉明,李文,王昌美,李龍江,楊湛,陳亞多.  臨床口腔醫(yī)學雜志. 2001(03)
[2]口腔鱗癌nm23-H1基因存在狀態(tài)和頸淋巴結轉(zhuǎn)移的關系[J]. 劉剛,李金榮,東耀峻.  實用口腔醫(yī)學雜志. 2001(01)
[3]口腔鱗癌組織中nm23-H1基因的mRNA表達及臨床意義[J]. 張韜,杜德順,賴欽聲,趙玉霞,柴京.  現(xiàn)代口腔醫(yī)學雜志. 1999(02)
[4]與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23高度同源的nm23－H3b基因的克隆和[J]. 江賢鵬,劉康達,周信達,湯釗猷,張志芳,張穎,吳祥甫.  中華醫(yī)學雜志. 1994(11)



本文編號：3513378