戊型肝炎病毒（HEV）為無包膜正二十面體單鏈正義RNA病毒,主要經(jīng)糞口途徑傳播,往往在發(fā)展中國家造成爆發(fā)流行,在發(fā)達(dá)國家導(dǎo)致散發(fā)流行。戊型肝炎的病死率為0.2-4%,孕婦病死率則高達(dá)10-20%,且越來越多的證據(jù)表明其可能是一種人獸共患病,給人類身體健康造成極大的危害。HEV由于一直缺乏穩(wěn)定有效的細(xì)胞感染模型,其感染入胞機(jī)制及其致病機(jī)理至今仍不清楚。本論文利用能較好模擬HEV表面結(jié)構(gòu)的HEV衣殼蛋白片段p239為模型,構(gòu)建p239相互作用蛋白篩選平臺(tái),篩選可能參與HEV入胞過程的宿主細(xì)胞蛋白,為揭示HEV感染入胞機(jī)制提供線索。p239為HEV pORF2（aa368-606）片段,原核表達(dá)能自組裝成15-30nm的蛋白顆粒,與戊型肝炎患者急性期血清反應(yīng)性良好,免疫恒河猴可以完全預(yù)防HEV導(dǎo)致的戊型肝炎。p239孵育HepG2細(xì)胞,能特異性的吸附并侵入細(xì)胞,且被p239中和單抗8C11阻斷。p239與野生1型HEV共孵育細(xì)胞,能阻斷HEV感染HepG2和人原代肝細(xì)胞,表明p239能較好模擬HEV表面結(jié)構(gòu)。利用p239較好模擬HEV表面結(jié)構(gòu)的特性,將其作為蛋白親合層析的配體/誘餌蛋白,借助... 

【文章來源】：廈門大學(xué)福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HEV流行分布圖

前言獲得豬HEV野毒株，并發(fā)現(xiàn)其堿基序列與此前公布的兩個(gè)美國戊肝患EV株同源性高達(dá)92％。近年來，越來越多的資料表明，HEV或與其相不僅分布于人類中，亦廣泛分布于多種動(dòng)物體內(nèi)，且發(fā)現(xiàn)不同物種之叉感染（如豬HEV成功感染恒河猴與黑猩猩[6]，食用未經(jīng)煮熟的攜帶或豬肝能引起戊型肝炎[7-10]，這些都提示戊型肝炎可能是一種人獸共

孕婦易感性高，重癥者較多，且早產(chǎn)、死胎率高。戊肝總病死率與甲肝相似或稍高，為 0.2-4%，但孕婦戊肝的病死率高達(dá) 10-20％，其機(jī)制尚未闡明[13-15]。所以，HEV已經(jīng)嚴(yán)重危害了人類的身體健康。2. HEV 基因組HEV基因組為單股正鏈RNA，大小約為 7.2knt，包含三個(gè)開放讀碼框架（ORF）[16]。5’端有m7G的帽子，之后為 28nt的非編碼區(qū)（NCR），3’端有PolyA尾，之前同樣存在 68nt的非編碼序列。ORF1（nt28－5109）主要編碼病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白，例如甲基轉(zhuǎn)移酶，RNA依賴的RNA合成酶等；ORF2（nt5147-7127）主要編碼病毒的結(jié)構(gòu)蛋白；ORF3 基因大小為 369nt，編碼一 123aa的短肽，其具體的生物學(xué)功能仍未闡明。HEV 1－3 型以及 4 型基因組見圖 3

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]HepG2細(xì)胞中與戊型肝炎病毒衣殼蛋白相互作用蛋白的初步研究[J]. 吳小成,何水珍,鄭子崢,孫媛媛,張軍,夏寧邵.  病毒學(xué)報(bào). 2006(05)
[3]戊型肝炎病毒衣殼蛋白中和表位間的構(gòu)象誘導(dǎo)[J]. 張軍,顧穎,歐山海,王穎彬,葉祥忠,林鑒,葛勝祥,夏寧邵.  病毒學(xué)報(bào). 2004(02)
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[8]生物傳感器對抗戊型肝炎病毒單克隆抗體部分特性的研究[J]. 顧穎,張軍,李少偉,葛勝祥,何志強(qiáng),朱子恒,鮮陽凌,李益民,夏寧邵.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2002(06)
[9]大腸桿菌表達(dá)的戊型肝炎病毒ORF2片段的聚合現(xiàn)象研究[J]. 李少偉,張軍,何志強(qiáng),葛勝祥,顧穎,林鑒,劉如石,夏寧邵.  生物工程學(xué)報(bào). 2002(04)
[10]一種帶增強(qiáng)子的原核高效表達(dá)載體的構(gòu)建及初步應(yīng)用[J]. 羅文新,張軍,楊海杰,李少偉,謝小燕,逄淑強(qiáng),李少菁,夏寧邵.  生物工程學(xué)報(bào). 2000(05)



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