目的建立穩(wěn)定表達(dá)TRPA1的HEK-293T細(xì)胞模型,并鑒定模型構(gòu)建是否成功。方法構(gòu)建TRPA1真核表達(dá)質(zhì)粒,采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將其轉(zhuǎn)入HEK-293T細(xì)胞中,經(jīng)G418篩選穩(wěn)定表達(dá)株,采用RT-PCR、免疫組化技術(shù),檢測HEK-293T細(xì)胞TRPA1基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達(dá)。結(jié)果經(jīng)酶切、測序證明,TRPA1基因的真核重組表達(dá)質(zhì)粒已成功構(gòu)建;PCR、免疫組化檢測結(jié)果表明,將此重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入HEK-293T細(xì)胞可穩(wěn)定表達(dá)TRPA1基因。結(jié)論成功構(gòu)建了能穩(wěn)定表達(dá)TRPA1通道的HEK-293T細(xì)胞株,為體外研究TRPA1生理病理功能和篩選相關(guān)TRPA1通道調(diào)節(jié)劑奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國藥理學(xué)通報(bào). 2019,35(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料
    1.1 細(xì)胞、菌株及試劑
    1.2 儀器
2 方法
    2.1 TRPA1基因的擴(kuò)增及克隆
    2.2 TRPA1基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
    2.3 脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞
    2.4 轉(zhuǎn)染細(xì)胞TRPA1基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)的檢測
        2.4.1 RT-PCR檢測基因的轉(zhuǎn)錄
        2.4.2 免疫組化檢測蛋白的表達(dá)
3 結(jié)果
    3.1 TRPA1基因的RT-PCR擴(kuò)增
    3.2 T-easy-1.9和T-easy-1.5重組克隆質(zhì)粒的酶切鑒定與測序
    3.3 TRPA1真核重組表達(dá)質(zhì)粒的酶切鑒定
    3.4 TRPA1基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)的RT-PCR及免疫組化檢測結(jié)果
4 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中TRPV1與cAMP/PKA通路調(diào)控機(jī)制研究[J]. 高峰,盧偉龍,王華林,吳媛媛,王斌,李敏.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2018(08)
[2]TRP通道與偏頭痛[J]. 王勝蘭,戴毅,劉曉麗,張文生.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2013(10)



本文編號：3508359