問號(hào)鉤端螺旋體黃疸出血群賴型賴株的全基因組測(cè)序工作已經(jīng)完成，在基因詮釋的基礎(chǔ)上，預(yù)測(cè)出幾個(gè)可能具有溶血活性的蛋白，對(duì)它們進(jìn)行克隆、表達(dá)和溶血活性的初步研究。本實(shí)驗(yàn)主要研究問號(hào)鉤端螺旋體溶血素LA3937和LA1029的溶血機(jī)理和細(xì)胞毒性，進(jìn)一步探討問號(hào)鉤端螺旋體的致病機(jī)理。我們分別從細(xì)胞水平、亞細(xì)胞水平、分子水平以及整體動(dòng)物水平考察了溶血素的生物功能。 細(xì)胞水平：使用倒置顯微鏡，直接觀察活體培養(yǎng)細(xì)胞的變化。亞細(xì)胞水平：使用透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡、熒光共聚焦顯微鏡，觀察溶血素作用細(xì)胞后，細(xì)胞膜、細(xì)胞器、細(xì)胞核、細(xì)胞表面形態(tài)以及細(xì)胞骨架等的變化，探討溶血素的作用機(jī)制和致病機(jī)理。分子水平：A．分子水平的考察中，細(xì)胞因子產(chǎn)生量的變化是很重要的方面。細(xì)胞因子具有非常廣泛的生物學(xué)活性，促進(jìn)靶細(xì)胞的增殖和分化，增強(qiáng)抗感染和細(xì)胞殺傷效應(yīng)，促進(jìn)或抑制其它細(xì)胞因子和膜表面分子的表達(dá)，促進(jìn)炎癥過程以及影響細(xì)胞代謝等。B．細(xì)胞在外界因子的作用下，細(xì)胞周期內(nèi)很多分子都會(huì)發(fā)生變化。細(xì)胞程序性死亡是細(xì)胞在外界因子，如毒素，的作用下可能發(fā)生的一種很重要的生理、病理變化，通過流氏細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。C... 

【文章來源】：沈陽藥科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
引言
第一章 鉤端螺旋體溶血素生物功能的研究
    第一節(jié) 鉤端螺旋體溶血素的特性分析
        1 材料和方法
        2 結(jié)果和討論
            2.1 鉤端螺旋體溶血素LA3937和LA1029的結(jié)構(gòu)域
            2.2 鉤端螺旋體溶血素LA3937和LA1029的跨膜結(jié)構(gòu)
            2.3 鉤端螺旋體溶血素LA3937和LA1029的相似性分析
            2.4 鉤端螺旋體溶血素LA3937的二級(jí)結(jié)構(gòu)
        3 小結(jié)
    第二節(jié) 鉤端螺旋體溶血素溶血活性的影響因素
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
        3 結(jié)果和討論
            3.1 溶血素LA3937和LA1029的表達(dá)驗(yàn)證及純化結(jié)果
            3.2 鉤端螺旋體溶血素LA3937溶血活性影響因子
            3.3 鉤端螺旋體溶血素LA1029溶血活性影響因子
            3.4 溶血素LA3937和LA1029作用綿羊紅細(xì)胞透射電子顯微鏡觀察
        4 小結(jié)
    第三節(jié) 鉤端螺旋體溶血素對(duì)宿主免疫細(xì)胞的作用
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
        3 結(jié)果和討論
            3.1 倒置光學(xué)顯微鏡觀察BALB／C小鼠免疫細(xì)胞的變化情況
            3.2 透射電鏡觀察BALB／C小鼠淋巴細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)的變化
            3.3 熒光共聚焦電鏡觀察BALB／C小鼠免疫細(xì)胞細(xì)胞骨架的變化
            3.4 掃描電鏡觀察巨噬細(xì)胞細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)的變化
            3.5 溶血素作用小鼠淋巴和巨噬細(xì)胞引起細(xì)胞因子產(chǎn)生水平的變化
        4 小結(jié)
    第四節(jié) 鉤端螺旋體溶血素對(duì)宿主組織細(xì)胞的作用
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
        3 結(jié)果和討論
            3.1 倒置光學(xué)顯微鏡觀察人組織細(xì)胞的變化
            3.2 透射電鏡觀察人組織細(xì)胞內(nèi)部的亞顯微水平的變化
            3.3 流氏細(xì)胞儀觀察細(xì)胞凋亡現(xiàn)象
            3.4 溶血素LA3937引起人組織細(xì)胞細(xì)胞因子產(chǎn)生水平的變化
        4 小結(jié)
    第五節(jié) 鉤端螺旋體溶血素LA3937作用人肝L-02細(xì)胞引起細(xì)胞表達(dá)譜的變化以及熒光定量PCR的檢驗(yàn)分析
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
        3 結(jié)果和討論
            3.1 基因芯片質(zhì)控分析
            3.2 人肝L-02細(xì)胞表達(dá)譜的變化
            3.3 熒光定量PCR檢測(cè)宿主細(xì)胞的表達(dá)譜中部分基因的變化
        4 小結(jié)
    第六節(jié) 鉤端螺旋體溶血素LA3937靜脈注射昆明小鼠引起組織器官以及血液學(xué)指標(biāo)的變化
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
        3 結(jié)果與討論
            3.1 肉眼直接觀察肝、腎、肺的變化
            3.2 HE染色檢測(cè)肺出血情況
            3.3 溶血素LA3937靜脈注射昆明小鼠引起血液學(xué)指標(biāo)的變化
        4 小結(jié)
第二章 鉤端螺旋體脂酶水解活性的探究
    第一節(jié) 鉤端螺旋體脂酶的特性分析
        1 材料和方法
        2 結(jié)果和討論
            2.1 鉤端螺旋體溶血素LA0399的結(jié)構(gòu)域
            2.2 鉤端螺旋體溶血素LA0399的跨膜結(jié)構(gòu)
            2.3 鉤端螺旋體溶血素LA0399的進(jìn)化樹分析
        3 小結(jié)
    第二節(jié) 脂酶的克隆、表達(dá)和水解活性探究
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
        3 結(jié)果和討論
            3.1 鉤端螺旋體脂酶基因的克隆、表達(dá)和驗(yàn)證
            3.2 純化脂酶蛋白的定量
            3.3 鉤端螺旋體脂酶水解活性的檢測(cè)
        4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3500382