目的構(gòu)建、拯救以PR8流感病毒為載體嵌合HAdV六鄰體蛋白抗原表位的疫苗候選株,對其免疫原性及免疫保護(hù)性進(jìn)行評價(jià)。方法應(yīng)用反向遺傳學(xué)技術(shù),以流感病毒PR8為載體,將HAdV六鄰體蛋白抗原表位的基因插入流感病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒NS1-Hexon,將重組質(zhì)粒與PR8流感病毒其他7個(gè)基因組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染COS-1/MDCK共培養(yǎng)細(xì)胞,成功拯救嵌合HAdV六鄰體抗原表位重組疫苗候選株,命名為rFLU/HAdV/Hexon,通過HA、RT-PCR、IFA、Western blotting和電鏡等方法對rFLU/HAdV/Hexon進(jìn)行鑒定。rFLU/HAdV/Hexon經(jīng)雞胚培養(yǎng)、濃縮純化后滴鼻免疫Balb/c小鼠,評價(jià)小鼠機(jī)體產(chǎn)生的體液免疫、細(xì)胞免疫和黏膜免疫應(yīng)答,進(jìn)一步采用PR8流感病毒和HAdV-3病毒攻擊小鼠評價(jià)其免疫保護(hù)性。結(jié)果成功拯救出基于PR8流感病毒為載體嵌合HAdV六鄰體蛋白抗原表位的rFLU/HAdV/Hexon疫苗候選株。rFLU/HAdV/Hexon疫苗株形態(tài)符合流感病毒典型特征,能夠誘導(dǎo)小鼠機(jī)體產(chǎn)生高效價(jià)的針對PR8和HAdV-3的特異性抗體,肺鼻灌洗液可檢... 

【文章來源】：免疫學(xué)雜志. 2014,30(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon的中和效價(jià)Fig2Neutralizingantibodytitersofmiceimmunizedwiththe

偽敲庖?Balb/c小鼠二免10d，PR8感染Balb/c小鼠。結(jié)果顯示rFLU/HAdV/Hexon實(shí)驗(yàn)組小鼠體質(zhì)量變化不明顯（圖6a），無死亡（圖6b），肺、鼻病毒載量顯著降低（圖6c）。PBS組小鼠體質(zhì)量下降明顯，最終死亡，肺、鼻均檢測到相對較高的病毒載量。說明重組rFLU/HAdV/Hexon疫苗株對小鼠PR8感染具有較好的免疫保護(hù)效果。3討論HAdV是引起呼吸道感染的重要病毒病原之一，在兒童可引起嚴(yán)重的下呼吸道感染，近年來研究表明a）IgGtitersagainstHAdV-3；b)IgG1titersagainstHAdV-3;c)IgG2atitersagainstHAdV-3.*P<0.05，**P<0.01.圖3小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon產(chǎn)生針對HAdV-3的血清抗體效價(jià)Fig3SerumantibodytitersofmiceimmunizedwiththerecombinantvirusesrFLU/HAdV/Hexona)sIgAtitersagainstHAdVinlunglavage;b)sIgAtitersagainstHAdVinnasallavage.*P<0.05，**P<0.01.圖4小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon產(chǎn)生針對HAdV-3的黏膜抗體效價(jià)Fig4MucosalantibodytitersofmiceimmunizedwiththerecombinantvirusesrFLU/HAdV/HexonHAdV-3challengeofvaccinatedmice.a)Normal,104TCID50,105TCID50,andPBSmicepathologicalexaminationwereperformedbyH&Estainingoflungtissues;b)virusreplicationofHAdV-3inlungtissueweremeasuredbyqPCR.*P<0.05,vsPBS.圖5rFLU/HAdV/Hexon免疫小鼠對腺病毒攻擊的免疫保護(hù)效果Fig5ProtectiveefficiacyofrFLU/HAdV/HexoninBalb/cmiceafterchallengedwithHAdV-3·379·

說明重組rFLU/HAdV/Hexon疫苗株對小鼠PR8感染具有較好的免疫保護(hù)效果。3討論HAdV是引起呼吸道感染的重要病毒病原之一，在兒童可引起嚴(yán)重的下呼吸道感染，近年來研究表明a）IgGtitersagainstHAdV-3；b)IgG1titersagainstHAdV-3;c)IgG2atitersagainstHAdV-3.*P<0.05，**P<0.01.圖3小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon產(chǎn)生針對HAdV-3的血清抗體效價(jià)Fig3SerumantibodytitersofmiceimmunizedwiththerecombinantvirusesrFLU/HAdV/Hexona)sIgAtitersagainstHAdVinlunglavage;b)sIgAtitersagainstHAdVinnasallavage.*P<0.05，**P<0.01.圖4小鼠免疫rFLU/HAdV/Hexon產(chǎn)生針對HAdV-3的黏膜抗體效價(jià)Fig4MucosalantibodytitersofmiceimmunizedwiththerecombinantvirusesrFLU/HAdV/HexonHAdV-3challengeofvaccinatedmice.a)Normal,104TCID50,105TCID50,andPBSmicepathologicalexaminationwereperformedbyH&Estainingoflungtissues;b)virusreplicationofHAdV-3inlungtissueweremeasuredbyqPCR.*P<0.05,vsPBS.圖5rFLU/HAdV/Hexon免疫小鼠對腺病毒攻擊的免疫保護(hù)效果Fig5ProtectiveefficiacyofrFLU/HAdV/HexoninBalb/cmiceafterchallengedwithHAdV-3·379·

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重組嵌合表達(dá)G蛋白中和表位的流感病毒載體RSV疫苗構(gòu)建和免疫保護(hù)效果[J]. 卞成蓉,劉娜,邢麗,段躍強(qiáng),王希良,周婭,楊鵬輝.  免疫學(xué)雜志. 2013(05)



本文編號：3482547