發(fā)布時(shí)間：2021-11-07 01:44

　　瘧疾是一種嚴(yán)重危害人類健康的蟲媒性傳染病，尤其在熱帶、亞熱帶地區(qū)流行廣泛。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，全球每年有近3-5億人感染瘧疾，其中約300萬人死亡。在我國也有24個(gè)省、市及自治區(qū)不同程度地存在瘧疾流行。據(jù)我國衛(wèi)生部瘧疾委員會(huì)最新資料顯示，南部地區(qū)如云南、廣西、海南等省瘧疾發(fā)病率較往年都有不同程度的提高，因此，瘧疾的防治始終是寄生蟲病研究的重點(diǎn)之一。瘧疾的診斷是瘧疾防治工作中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，目前瘧疾診斷技術(shù)正朝著簡便、快速、靈敏、特異及結(jié)果易于判定的方向發(fā)展，而以單抗為基礎(chǔ)的Dipstick免疫層析技術(shù)具有以上優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用前景廣泛。本研究旨在利用瘧原蟲的乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase, LDH）為診斷靶抗原，通過對該蛋白進(jìn)行克隆、表達(dá)，制備單抗，并篩選、配對建立反應(yīng)模式等系列研究，開發(fā)用于瘧疾快速診斷的免疫層析檢測試劑盒。 研究中，首先將惡性瘧原蟲的LDH（Plasmodium falciparum lactate dehydrogenase, LDHpf）基因克隆至pET-23a（+）表達(dá)載體中，構(gòu)建pET23-LDH重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒在BL21中得到高效表達(dá)，S... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

pET23一LDH重組質(zhì)粒的酶切鑒定l、分子量標(biāo)準(zhǔn)2、EeoRI+salx酶切pGEx一LDH3、sall酶切pET一23

為可溶性表達(dá)。用凝膠光密度圖像分析系統(tǒng)檢測目的蛋白占菌體總蛋白的41.2%(圖1一6)。20.114.4圖1一6重組蛋白的SDS一PAGE分析1、蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)2、誘導(dǎo)前的pET23一LDH3、誘導(dǎo)后的pET23一LDH4、誘導(dǎo)前的pGEX一LDHS、誘導(dǎo)后的pGEx--LDH6、重組菌pET23一LDH超聲后沉淀7、重組菌pET23一LDH超聲后上清Fig.1一6SDS~PAGEanalysisofthereeombinantProteinl、M出火erZ、PET23一LDHwitholltinduction3、PET23一LDHafterinduetion4、PGEX一LDHwithoutinduction5.pGEX一LDHafterinduction6.pET23一LDHlysisPreeiPitateaftersonieation7.pET23一LDHlysissuPematentaftersonieation

硝酸纖維素膜困c膜)上，以免疫小鼠血清為抗體進(jìn)行westem七lot分析，結(jié)果顯示在33KDa蛋白處出現(xiàn)一特異性反應(yīng)區(qū)帶，而pET一23a轉(zhuǎn)化菌則無明顯的帶出現(xiàn)(圖1一8)，表明pET23一LDH有良好的抗原性。多抗鑒定采用West~blot，結(jié)果顯示該免疫小鼠血清能識(shí)別惡性瘧原蟲和間日瘧原蟲分子量約為33KDa處的蟲源蛋白，與惡性瘧原蟲抗原一23-

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3480920