目的建立血管衰老模型,觀察比較高葡萄糖（HG）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、過氧化氫（H₂O₂）及棕櫚酸（PA）對原代大鼠主動脈內皮細胞（RAEC）誘導衰老作用。方法取2月齡雄性Wistar大鼠,組織貼塊法提取原代RAEC并采用免疫熒光細胞化學染色檢測CD31的表達并進行鑒定。分別應用30 mmol/L葡萄糖（HG）、 10μmol/L AngⅡ、 100μmol/L H₂O₂、 0.5 mmol/L PA處理原代RAEC 24 h。采用β-半乳糖苷酶染色觀察細胞衰老情況,實時熒光定量PCR檢測衰老相關基因P16 mRNA的水平, Western blot法檢測衰老相關基因P16、 P21、 P53蛋白水平;免疫熒光細胞化學染色觀察P16的表達, CCK-8法觀察細胞存活率。結果與對照組相比,各處理組RAEC中β-半乳糖苷酶染色細胞增加,以H₂O₂、 PA處理組更明顯; HG、 AngⅡ、 H₂O₂、 PA處理均可... 

【文章來源】：細胞與分子免疫學雜志. 2019,35(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

分析．1:對照組;2:HG處理組;3:AngⅡ處理組;4:H2O2處理組;5:PA處理組．bP＜0．01vs1．圖2ＲAEC的衰老相關SA-β-gal染色結果A:ＲAEC的SA-β-gal活性(SA-β-gal染色

A:實時定量PCＲ檢測ＲAEC的P16mＲNA水平;B:Westernblot法檢測ＲAEC的P16、P21、P53蛋白水平;C:ＲAEC的P16、P21、P53蛋白水平的半定量分析．1:對照組;2:HG處理組;3:AngⅡ處理組;4:H2O2處理組;5:PA處理組．a(chǎn)P＜0．05，bP＜0．01vs1．圖3ＲAEC的P16、P21、P53水平A:對照組;B:HG處理組;C:AngⅡ處理組;D:H2O2處理組;E:PA處理組．圖4ＲAEC的P16表達(免疫熒光細胞化學染色，×400)2．5H2O2和PA處理降低ＲAEC存活率CCK-8法檢測細胞存活率，結果發(fā)現(xiàn)HG處理組與AngⅡ處理組細胞存活率與對照組相當，而H2O2處理組與PA處理組細胞存活率顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0．01，圖5)。1:對照組;2:HG處理組;3:AngⅡ處理組;4:H2O2處理組;5:PA處理組．bP＜0．01vs1．圖5ＲAEC細胞存活率3討論血管老化是促進心血管疾病發(fā)生的重要危險因素，而內皮細胞衰老是血管整體老化的重要病理生理改變之一［17］。欲深入研究血管內皮細胞衰老及抗衰老的相關機制，首先要成功構建血管內皮細胞衰老模型，本研究提取純化ＲAEC，觀察HG、AngⅡ、H2O2、高脂對主動脈內皮細胞誘導衰老的作用。細胞周期蛋白依賴性激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor，CKI)是調節(jié)細胞增殖的重要信號分子，其中最具代表性的是P16、P21和P53。CKI主要通過與細胞周期蛋白(cyclin)競爭細胞周期蛋白依賴激酶(cyclin-dependentkinase，CDK)，減少cyclin/CDK復?

G處理組;C:AngⅡ處理組;D:H2O2處理組;E:PA處理組．圖4ＲAEC的P16表達(免疫熒光細胞化學染色，×400)2．5H2O2和PA處理降低ＲAEC存活率CCK-8法檢測細胞存活率，結果發(fā)現(xiàn)HG處理組與AngⅡ處理組細胞存活率與對照組相當，而H2O2處理組與PA處理組細胞存活率顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0．01，圖5)。1:對照組;2:HG處理組;3:AngⅡ處理組;4:H2O2處理組;5:PA處理組．bP＜0．01vs1．圖5ＲAEC細胞存活率3討論血管老化是促進心血管疾病發(fā)生的重要危險因素，而內皮細胞衰老是血管整體老化的重要病理生理改變之一［17］。欲深入研究血管內皮細胞衰老及抗衰老的相關機制，首先要成功構建血管內皮細胞衰老模型，本研究提取純化ＲAEC，觀察HG、AngⅡ、H2O2、高脂對主動脈內皮細胞誘導衰老的作用。細胞周期蛋白依賴性激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor，CKI)是調節(jié)細胞增殖的重要信號分子，其中最具代表性的是P16、P21和P53。CKI主要通過與細胞周期蛋白(cyclin)競爭細胞周期蛋白依賴激酶(cyclin-dependentkinase，CDK)，減少cyclin/CDK復合物形成，阻止DNA合成基因的轉錄，從而導致細胞周期阻滯，促使細胞衰老。既往研究證實，P16、P21和P53的轉錄產(chǎn)物作為標志物在衰老細胞中普遍增加［18－19］。因此，本研究采用上述指標作為內皮細胞衰老的功能標志物，評價細胞衰老程度。葡萄糖是一種人體必需的營養(yǎng)物質，正常情況下參與機體的各項生理過程，但過量的葡萄糖在誘導血管內皮細胞的損傷、

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]血管內皮細胞衰老的研究進展[J]. 周智輝,戴亞蕾.  同濟大學學報(醫(yī)學版). 2014(02)
[3]137Cs γ-射線誘導小鼠胚胎成纖維細胞衰老模型的建立[J]. 路璐,黃頌,李德冠,張俊伶,邢永華,李程程,孟愛民.  細胞與分子免疫學雜志. 2014(01)



本文編號：3479807