目的：通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)研究觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells, MSCs）誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞及相關(guān)調(diào)控基因的時(shí)序動(dòng)態(tài)表達(dá)，從中篩選出調(diào)控MSCs定向分化為心肌細(xì)胞的重要基因，揭示MSCs定向分化的分子調(diào)控機(jī)制。方法：無菌條件下沖洗Wistar大鼠雙側(cè)股骨和脛骨的骨髓腔獲得細(xì)胞，貼壁篩選法純化MSCs并進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增。采用第八代的MSCs，在體外以5-氮雜胞苷（5-azacytidine,5-aza）進(jìn)行誘導(dǎo)，在體內(nèi)將MSCs注入正常Wistar大鼠左室前壁心肌組織內(nèi)進(jìn)行誘導(dǎo)，均連續(xù)觀察8w，顯微鏡下觀察其形態(tài)變化，熒光免疫組化方法鑒定心肌特征性蛋白肌球蛋白重鏈（MHC）和連接蛋白Connexin43（Cx43）的表達(dá)，應(yīng)用半定量RT-PCR技術(shù)檢測TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4, MEF-2C、TEF-1和RAR（等心肌細(xì)胞發(fā)育相關(guān)調(diào)控基因mRNA在體內(nèi)和體外分化過程中的時(shí)序動(dòng)態(tài)表達(dá)，篩選出MSCs定向分化為心肌細(xì)胞的重要調(diào)控基因。結(jié)果：1）采用貼壁篩選法可獲得純度較高的MSCs，體外培養(yǎng)過程中細(xì)胞形態(tài)保持一致，擴(kuò)增速度快，培養(yǎng)至八代時(shí)細(xì)胞... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

原代培養(yǎng)24h的MSCs(相差顯微鏡×200)

圖 1-1 原代培養(yǎng) 24h 的 MSCs (相差顯微鏡×200) 圖 1-2 原代培養(yǎng) 3d 的 MSCs(相差顯微鏡×200)Fig.1-1 The primary MSCs cultured for 24 hours Fig.1-2 The primary MSCs cultured for 3 days(phase-contrast microscope×200) (phase-contrast microscope×200)

24h 的 MSCs (相差顯微鏡×200) 圖 1-2 原代培養(yǎng) 3d 的ary MSCs cultured for 24 hours Fig.1-2 The primary Microscope×200) (phase-contrast micro


本文編號(hào)：3478256