目的：通過體內和體外實驗研究觀察骨髓間充質干細胞（mesenchymal stem cells, MSCs）誘導分化為心肌細胞及相關調控基因的時序動態(tài)表達，從中篩選出調控MSCs定向分化為心肌細胞的重要基因，揭示MSCs定向分化的分子調控機制。方法：無菌條件下沖洗Wistar大鼠雙側股骨和脛骨的骨髓腔獲得細胞，貼壁篩選法純化MSCs并進行體外培養(yǎng)擴增。采用第八代的MSCs，在體外以5-氮雜胞苷（5-azacytidine,5-aza）進行誘導，在體內將MSCs注入正常Wistar大鼠左室前壁心肌組織內進行誘導，均連續(xù)觀察8w，顯微鏡下觀察其形態(tài)變化，熒光免疫組化方法鑒定心肌特征性蛋白肌球蛋白重鏈（MHC）和連接蛋白Connexin43（Cx43）的表達，應用半定量RT-PCR技術檢測TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4, MEF-2C、TEF-1和RAR（等心肌細胞發(fā)育相關調控基因mRNA在體內和體外分化過程中的時序動態(tài)表達，篩選出MSCs定向分化為心肌細胞的重要調控基因。結果：1）采用貼壁篩選法可獲得純度較高的MSCs，體外培養(yǎng)過程中細胞形態(tài)保持一致，擴增速度快，培養(yǎng)至八代時細胞... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數】：84 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

原代培養(yǎng)24h的MSCs(相差顯微鏡×200)

圖 1-1 原代培養(yǎng) 24h 的 MSCs (相差顯微鏡×200) 圖 1-2 原代培養(yǎng) 3d 的 MSCs(相差顯微鏡×200)Fig.1-1 The primary MSCs cultured for 24 hours Fig.1-2 The primary MSCs cultured for 3 days(phase-contrast microscope×200) (phase-contrast microscope×200)

24h 的 MSCs (相差顯微鏡×200) 圖 1-2 原代培養(yǎng) 3d 的ary MSCs cultured for 24 hours Fig.1-2 The primary Microscope×200) (phase-contrast micro


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