鈉／碘同向轉運體（NIS）是位于甲狀腺濾泡細胞基底膜上的一種糖蛋白，介導甲狀腺激素合成的第一步，即碘的主動轉運。NIS在甲狀腺的病理生理中舉足輕重，近年來它已成為碘缺乏病和其他甲狀腺疾病防治領域的研究熱點。 本研究工作中，筆者以大鼠cDNA文庫為模板，PCR方法擴增出全長大鼠NIS基因編碼序列，克隆入pGEM-T Easy載體。然后將目的片段分別插入非融合型原核表達載體pBV220和融合型原核表達載體pGEX-3X中。重組表達質(zhì)粒pBV220／NIS和pGEX-3X／NIS分別轉化到大腸桿菌DH5 α和BL21（DE3）中誘導表達。據(jù)SDS-PAGE電泳我們發(fā)現(xiàn)前者未見明顯表達，而后者有期望蛋白表達。以GST標簽抗體行Western blotting進一步鑒定該融合蛋白。優(yōu)化表達條件并對包涵體進行分離、溶解和復性處理，使得融合蛋白的產(chǎn)量達總蛋白的58％，相當于1.02g／每升培養(yǎng)物。 本實驗在大腸桿菌中成功表達了大鼠NIS基因，為基因工程制備NIS蛋白奠定了基礎。 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

lYIS擴姍

pGEM-TFJNIS的鑒定

pBV220/NIS的兩切鑒定

【參考文獻】：
期刊論文
[1]用于PCR實驗的畢赤酵母基因組DNA制備方法的比較[J]. 劇海,梁東春,郭剛,張鏡宇.  天津醫(yī)藥. 2003(05)
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本文編號：3472769