轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）/Smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與人類(lèi)的多種生理病理發(fā)生機(jī)制相關(guān),但是該信號(hào)通路中Smad3被磷酸化的時(shí)空信息仍然不完全清楚。為了動(dòng)態(tài)觀察活細(xì)胞生理狀態(tài)下Smad3被磷酸化的過(guò)程,首先進(jìn)行ECFP-Smad3-Citrine（Smad3biosensor）融合蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定;然后轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞并觀察轉(zhuǎn)染效率和融合蛋白表達(dá)情況。在熒光顯微鏡下,應(yīng)用MetaFlour FRET 4.6軟件測(cè)量TGF-β1刺激293T細(xì)胞前后Smad3biosensor的熒光能量共振轉(zhuǎn)移（FRET）的變化情況。結(jié)果顯示,Smad3biosensor轉(zhuǎn)染效率達(dá)40%,融合蛋白表達(dá)成功。TGF-β1刺激293T細(xì)胞10min后,監(jiān)測(cè)到胞質(zhì)內(nèi)FRET值逐漸減小,青色熒光蛋白（CFP）減弱,黃色熒光蛋白變體（Citrine）增強(qiáng),歷時(shí)約300s后逐漸恢復(fù)。應(yīng)用FRET技術(shù)能使我們?cè)诨罴?xì)胞生理狀態(tài)下,實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)TGF-β1/Smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的過(guò)程。 

【文章來(lái)源】：生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2014,31(05)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
引言
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 質(zhì)粒、菌株和細(xì)胞
        1.1.2 試劑
        1.1.3 熒光成像系統(tǒng)
    1.2 ECFP-Smad3-Citrine融合蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)鑒定
    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
    1.4 熒光成像及FRET檢測(cè)
        1.4.1 校正因子計(jì)算
        1.4.2 FRET檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 Smad3biosensor的表達(dá)、FRET值檢測(cè)及計(jì)算
    2.2 TGF-β1誘導(dǎo)Smad3融合蛋白的動(dòng)力學(xué)研究
3 討論



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