目的：建立四環(huán)素調控的mPTA1／CD226轉基因小鼠，對轉基因小鼠胸腺細胞的發(fā)育進行研究。 方法：①使用pcDNA3-mPTA1和pBI-5載體構建用于四環(huán)素調控轉基因小鼠制備的pBI-5-mPTA1載體。②采用顯微注射的方法將pBI-5-mPTA1載體片段導入B6D1F1小鼠受精卵，對新生小鼠耳成纖維細胞進行體外培養(yǎng)，用含rtTA的pUHD17.1質粒轉染細胞，選出熒光素酶表達活性依賴Dox的小鼠。③將陽性小鼠與正常C57BL／6小鼠交配，分別使用mPTA1和熒光素酶（luciferase）引物對子代小鼠的基因組DNA進行PCR檢測和鑒定，選取雙陽性的Ptet-mPTA1轉基因小鼠的F1代，將其繼續(xù)與C57BL／6小鼠交配，不斷得到子代小鼠，直至F4代以后。④將陽性的Ptet-mPTA1轉基因小鼠與攜帶有tTA的EμSR-tTA轉基因小鼠雜交，得到子代小鼠，同時使用mPTA1和tTA引物對其基因組DNA進行PCR檢測，選取mPTA1和tTA雙陽性的小鼠。⑤使用熒光素酶檢測試劑盒對雜交的陽性小鼠的不同組織，如胸腺、脾臟、心臟、腎臟等進行 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

TN細胞的分化和發(fā)育

通過陽性選擇和陰性選擇，絕大多數(shù)的胸腺細胞發(fā)生凋亡，只有不足5%的細胞最終發(fā)育為CD4或CDS單陽性細胞，離開胸腺進入循環(huán)成為成熟T細胞(圖2)8]f。在選擇過程中，胸腺基質細胞上自身膚一MHCI類或11類分子復合物與胸腺細胞TCR的相互作用起關鍵作用，此外，有一些細胞砧附分子在整個過程中也發(fā)揮著重要的調節(jié)作用。最近的研究表明，在陽性選擇的過程中，DP細胞與胸腺基質細胞可以形成動態(tài)的免疫突觸，這與陰性選擇過程中形成的穩(wěn)定長效的免疫突觸具有很大的不同，但這兩種免疫突觸與成熟T細胞活化過程中形成的免疫突觸都不相同件川。因此有學者推斷，在胸腺細胞的發(fā)育過程中，由脂筏中信號分子和細胞骨架蛋白重新分布形成的免疫突觸可能提供細胞存活信號，而影響免疫突觸形成的因素也可能同時影響T細胞的選擇〔’2】。此外

yliitp袍R)的DNA結合結構域白16(virionprotein16ofhe印essimplexviurs，Vp域融合構成。素調控系統(tǒng)的結構和原理系統(tǒng)包括了兩個部分，第一部分是調控部分，tTA在組動子的控制下組成型表達;第二部分包含目的基因，它菌ett操縱子序列(ett叩erator，etot)的人巨細胞病毒aminimalpromotersequeneeofhteh切mnaeytomegaloviurv)的調控。在沒有鹽酸強力霉素(doxycyeline，oox生物存在的情況下，tAT可以結合etto而活化Pcmv，的基因的轉錄。當Dox存在時，其可以結合tAT，從使它從etto上解離下來，終止下游目的基因的轉錄[39]

【參考文獻】：
期刊論文
[1]小鼠PTA1/CD226分子參與殺傷性T細胞（CTL）的分化[J]. 徐向升,張贇,張新海,莊然,曹云新,金伯泉.  中華微生物學和免疫學雜志. 2006(01)
[2]CD226在NK細胞亞群上表達規(guī)律與功能關系的研究[J]. 張赟,賈衛(wèi),韓衛(wèi)寧,曹云新,金伯泉.  中國免疫學雜志. 2004(11)
[3]小鼠CD226（PTA1）的基因克隆及其異型[J]. 張新海,李德敏,歐陽為明,賈衛(wèi),謝鑫,陳麗華,寧雙飛,張赟,金伯泉.  中國免疫學雜志. 2002(06)
[4]PTA1單克隆抗體誘導人血小板活化聚集和胞漿Ca2+水平的升高[J]. 孫忱,金伯泉,劉雪松,楊琨,張婷婷,董邦權,李家增,武懷珠,彭林,包承鑫,武文杰.  中華血液學雜志. 1998(03)



本文編號：3463573