目的：研究人類正常和退變椎間盤的基因表達(dá)譜，分析人退變椎間盤基因表達(dá)水平的變化，探討椎間盤退變的機(jī)制。 方法：手術(shù)切除的病人無(wú)菌新鮮退變及正常椎間盤標(biāo)本各3例，按條件優(yōu)化的一步法抽提椎間盤組織的總RNA并純化mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄分別用cy3，cy5熒光標(biāo)記，獲得兩組椎間盤cDNA的探針，與含有4096條人類全長(zhǎng)基因的cDNA表達(dá)譜芯片雜交，通過計(jì)算機(jī)分析判定差異表達(dá)的基因，并對(duì)所獲得的基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析。HE染色檢測(cè)椎間盤細(xì)胞數(shù)，TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，并對(duì)凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax蛋白進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)，驗(yàn)證基因芯片篩選結(jié)果的可靠性。 結(jié)果：在4096條基因中，退變與正常椎間盤組織間存在差異表達(dá)的基因群。在所檢測(cè)的3對(duì)臨床標(biāo)本中，發(fā)現(xiàn)有差異表達(dá)的基因706條，已知功能基因中，358條基因表達(dá)量明顯下降（ratio＜0.5），298條基因表達(dá)量明顯上升（ratio＞2.0）。與凋亡相關(guān)的差異表達(dá)基因8條，其中Bax蛋白相關(guān)基因表達(dá)增高，EMP-1相關(guān)基因表達(dá)呈明顯的上調(diào)，Bcl-2蛋白相關(guān)基因表達(dá)降低。退變椎間盤髓核細(xì)胞大量減少，凋亡率明顯上升，Bcl-2蛋白在... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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正常椎間盤纖維環(huán)組織HE染色(只120)

第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文圖1一1正常椎間盤纖維環(huán)組織HE染色(只120)Fzgl一1ImagesofHEstaininginnormallumbarintervertebralarmulusfibrosus(X120)圖1一2退變椎間盤纖維環(huán)組織HE染色(x120)Flgl一2ImagesofHEstainingindegeneratedlumbariniervertebralannulusfibrosus(火120)

Figl一3ResultsofthetotalRNAagarosegeleleetroPhoresisindegeneratedandnormallumbarintervertebraldise.圖1一4基因表達(dá)譜芯片雙色熒光掃描Figl一4Scanningresultsofh沙ridizing51，alsongenechiPindegeneratedandnormallumbarin把rvertebraldisc.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3445603