目的：從豬囊尾蚴cDNA中擴(kuò)增出GP50編碼基因，亞克隆至真核表達(dá)載體，利用所得的重組蛋白，為建立一種靈敏檢測(cè)豬囊尾蚴感染的實(shí)驗(yàn)方法作準(zhǔn)備。方法：設(shè)計(jì)并合成引物，從豬囊尾蚴cDNA文庫(kù)中PCR擴(kuò)增GP50編碼基因，通過與線性克隆載體pGEM-T連接，經(jīng)酶切和PCR鑒定及DNA測(cè)序證實(shí)后，將目的基因亞克隆入雙表達(dá)載體pBK-CMV，將獲得的pBK-CMV-GP50陽性重組子轉(zhuǎn)化宿主菌E．coli BL21，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，Western blot鑒定。結(jié)果：PCR法擴(kuò)增出了一897bp左右的DNA片斷，將重組質(zhì)粒pGEM-T-GP50、pBK-CMV-GP50分別作BamH Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切，均能得到一個(gè)大小與PCR擴(kuò)增產(chǎn)物一致的插入片斷，對(duì)插入片斷的測(cè)序結(jié)果表明，GP50具有一個(gè)長(zhǎng)度為897bp的完整開放閱讀框（ORF），編碼298個(gè)氨基酸，理論分子量33kDa，與GenBank收錄（編號(hào)為AY212945）的豬囊尾蚴GP50基因具有高度的同源性（99％）。表明GP50基因的克隆和亞克隆均獲成功，用IPTG誘導(dǎo)帶有重組質(zhì)粒pBK-CMV-GP50的大腸桿菌，產(chǎn)物行SDS-PAGE... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
英文摘要
正文
    1 前言
    2 材料與方法
    3 結(jié)果
    4 討論
    5 結(jié)論
    6 參考文獻(xiàn)
附錄
    個(gè)人簡(jiǎn)介
致謝
綜述


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬帶絳蟲抗原基因TS76的克隆及原核表達(dá)[J]. 沈斌,高榮,孟民杰,沈翼,武梅,李江凌,龍章富,魏竹波,王克非,朱錦,付玉梅,卓麟,何紹江,劉世貴.  中國(guó)人獸共患病雜志. 2002(02)
[2]豬囊尾蚴特異抗原的基因克隆和表達(dá)[J]. 陳穎,劉森,薛�；I,李浩,張永紅,裘麗姝.  中國(guó)血吸蟲病防治雜志. 2000(05)
[3]整合素與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[J]. 劉永全.  國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè)). 2000(01)
[4]豬囊尾蚴重組體的培養(yǎng)及其誘導(dǎo)表達(dá)[J]. 王敏,徐之杰,李雅杰,王光岳,孫樹漢,郭瀛軍.  哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 1998(01)
[5]囊蟲病診斷用抗原編碼cDNA的分子克隆[J]. 孫樹漢,王俊霞,陳蕊雯,陸惠萍,彭郁蔥,王朝霞.  中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 1997(01)
[6]膜蛋白的糖脂錨及其臨床[J]. 劉新月.  武漢醫(yī)學(xué)雜志. 1996(01)
[7]應(yīng)用生物素—親和素系統(tǒng)診斷腦囊蟲病的研究[J]. 趙瑞,崔學(xué)良,胡忠義.  中國(guó)寄生蟲病防治雜志. 1990(02)



本文編號(hào)：3444603