發(fā)布時(shí)間：2021-10-08 19:06

　　目的研究結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）脂蛋白Rv1016c在Mtb感染和結(jié)核病發(fā)病中的作用和機(jī)制。方法將Mtb脂蛋白Rv1016c基因?qū)胍吧鷲u垢分枝桿菌（Mycobacterium smegmatis, MS）構(gòu)建重組菌株MS-Rv1016c,比較脂蛋白Rv1016c對菌體生長、成膜能力、細(xì)菌聚集、毒力等方面的影響,評估重組菌株MS-Rv1016c對自噬的影響。結(jié)果 Rv1016c基因的導(dǎo)入,因過表達(dá)脂蛋白使得MS的菌落變大、褶皺增加,使菌體聚集度降低,使細(xì)菌成膜速度加快、生物被膜產(chǎn)量增加;Rv1016c顯著抑制巨噬細(xì)胞自噬,促進(jìn)細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)持留。結(jié)論 Rv1016c能夠促進(jìn)MS生物被膜形成,抑制細(xì)胞自噬,增強(qiáng)細(xì)菌毒力。為研究脂蛋白在Mtb致病機(jī)理中的作用提供理論依據(jù)。 

【文章來源】：微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2019,47(04)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

MS-Ｒv1016c的ＲT-PCＲ及Western-blot鑒定結(jié)果Fig．1IdentificationofMS-Ｒv1016cbyＲT-PCＲandwestern-blot菌落形態(tài)在生長后其菌落呈顆粒注:A．ＲT-PCＲ;B．Western-blot

Ｒv1016c菌株表達(dá)Ｒv1016c蛋白;Western-blot結(jié)果顯示，MS-Ｒv1016c表達(dá)Ｒv1016c，表明MS-Ｒv1016c構(gòu)建成功，見圖1。注:A．ＲT-PCＲ;B．Western-blot。圖1MS-Ｒv1016c的ＲT-PCＲ及Western-blot鑒定結(jié)果Fig．1IdentificationofMS-Ｒv1016cbyＲT-PCＲandwestern-blot2．2菌落形態(tài)MS在生長7d后其菌落呈顆粒、結(jié)節(jié)或花菜狀，乳白色或米黃色，不透明。MS-Ｒv1016c菌落較大，褶皺較細(xì)，邊緣比較厚;而MS-p-MV261的菌落較小，整體圓潤，褶皺不清晰，見圖2。圖2MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c菌落形態(tài)圖(20×)Fig．2ThecharacteristicsforcolonymorphologyofMS-p-MV261andMS-Ｒv1016c(20×)·04·微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展2019年8月第47卷第4期ProginMicrobiolImmunol，Aug．2019，Vol．47No．4

2．3生長曲線結(jié)果顯示，MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c在培養(yǎng)8h后都進(jìn)入對數(shù)生長期，36h后均進(jìn)入平臺期。盡管生長曲線略有不同，但兩組的生長曲線并無明顯差異，見圖3。圖3MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c生長曲線的測定Fig．3ThegrowthcurvesforMS-p-MV261andMS-Ｒv1016c2．4聚集度結(jié)果顯示，各組細(xì)菌的數(shù)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)，而MS-p-MV261聚集較緊密，聚集度高;MS-Ｒv1016c明顯更疏松，聚集度差，見圖4。2．5生物膜形成MS-p-MV261形成菌膜較少，菌膜長成較慢，大部分菌體沉降于底部;而MS-Ｒv1016c明顯有菌膜，且MS-Ｒv1016c的菌膜更厚，褶皺更多，見圖5A。結(jié)果顯示，MS-Ｒv1016c的成膜量高于MS-p-MV261，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，見圖5B。2．6巨噬細(xì)胞自噬分析MS-Ｒv1016c顯著抑制了巨噬細(xì)胞自噬(P＜0．05)，降低了免疫細(xì)胞對細(xì)菌的清除作用，見圖6。注:NS．差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;A．MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c細(xì)菌菌落數(shù)量;B．MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c細(xì)菌聚集度差異檢測。圖4MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c細(xì)菌聚集度差異檢測Fig．4TheagglomerationofMS-p-MV261andMS-Ｒv1016cafterculturefor24h注:*P＜0．05;A．MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c生物成膜的觀察;B．MS-p-MV261和Ｒv1016c細(xì)菌成膜定量。圖5MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c生物成膜的觀察Fig．5ObservationofbiofilmformationfromMS-p-MV261andMS-Ｒv1016c微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展2019年8月第47卷第4期ProginMicrobiolImmunol，Aug．2019，Vol．47No．4·14·


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