目的研究結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）脂蛋白Rv1016c在Mtb感染和結核病發(fā)病中的作用和機制。方法將Mtb脂蛋白Rv1016c基因導入野生恥垢分枝桿菌（Mycobacterium smegmatis, MS）構建重組菌株MS-Rv1016c,比較脂蛋白Rv1016c對菌體生長、成膜能力、細菌聚集、毒力等方面的影響,評估重組菌株MS-Rv1016c對自噬的影響。結果 Rv1016c基因的導入,因過表達脂蛋白使得MS的菌落變大、褶皺增加,使菌體聚集度降低,使細菌成膜速度加快、生物被膜產量增加;Rv1016c顯著抑制巨噬細胞自噬,促進細菌在細胞內持留。結論 Rv1016c能夠促進MS生物被膜形成,抑制細胞自噬,增強細菌毒力。為研究脂蛋白在Mtb致病機理中的作用提供理論依據。 

【文章來源】：微生物學免疫學進展. 2019,47(04)

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【部分圖文】：

MS-Ｒv1016c的ＲT-PCＲ及Western-blot鑒定結果Fig．1IdentificationofMS-Ｒv1016cbyＲT-PCＲandwestern-blot菌落形態(tài)在生長后其菌落呈顆粒注:A．ＲT-PCＲ;B．Western-blot

Ｒv1016c菌株表達Ｒv1016c蛋白;Western-blot結果顯示，MS-Ｒv1016c表達Ｒv1016c，表明MS-Ｒv1016c構建成功，見圖1。注:A．ＲT-PCＲ;B．Western-blot。圖1MS-Ｒv1016c的ＲT-PCＲ及Western-blot鑒定結果Fig．1IdentificationofMS-Ｒv1016cbyＲT-PCＲandwestern-blot2．2菌落形態(tài)MS在生長7d后其菌落呈顆粒、結節(jié)或花菜狀，乳白色或米黃色，不透明。MS-Ｒv1016c菌落較大，褶皺較細，邊緣比較厚;而MS-p-MV261的菌落較小，整體圓潤，褶皺不清晰，見圖2。圖2MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c菌落形態(tài)圖(20×)Fig．2ThecharacteristicsforcolonymorphologyofMS-p-MV261andMS-Ｒv1016c(20×)·04·微生物學免疫學進展2019年8月第47卷第4期ProginMicrobiolImmunol，Aug．2019，Vol．47No．4

2．3生長曲線結果顯示，MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c在培養(yǎng)8h后都進入對數生長期，36h后均進入平臺期。盡管生長曲線略有不同，但兩組的生長曲線并無明顯差異，見圖3。圖3MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c生長曲線的測定Fig．3ThegrowthcurvesforMS-p-MV261andMS-Ｒv1016c2．4聚集度結果顯示，各組細菌的數量差異無統(tǒng)計學意義(P＞0．05)，而MS-p-MV261聚集較緊密，聚集度高;MS-Ｒv1016c明顯更疏松，聚集度差，見圖4。2．5生物膜形成MS-p-MV261形成菌膜較少，菌膜長成較慢，大部分菌體沉降于底部;而MS-Ｒv1016c明顯有菌膜，且MS-Ｒv1016c的菌膜更厚，褶皺更多，見圖5A。結果顯示，MS-Ｒv1016c的成膜量高于MS-p-MV261，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)，見圖5B。2．6巨噬細胞自噬分析MS-Ｒv1016c顯著抑制了巨噬細胞自噬(P＜0．05)，降低了免疫細胞對細菌的清除作用，見圖6。注:NS．差異無統(tǒng)計學意義;A．MS-p-MV261和MS-Ｒv1016c細菌菌落數量;B．MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c細菌聚集度差異檢測。圖4MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c細菌聚集度差異檢測Fig．4TheagglomerationofMS-p-MV261andMS-Ｒv1016cafterculturefor24h注:*P＜0．05;A．MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c生物成膜的觀察;B．MS-p-MV261和Ｒv1016c細菌成膜定量。圖5MS-p-MV261、MS-Ｒv1016c生物成膜的觀察Fig．5ObservationofbiofilmformationfromMS-p-MV261andMS-Ｒv1016c微生物學免疫學進展2019年8月第47卷第4期ProginMicrobiolImmunol，Aug．2019，Vol．47No．4·14·


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