本論文在楊芃原教授和韓澤廣研究員的指導(dǎo)下進(jìn)行，主要工作在國家人類基因組南方研究中心完成。本博士論文的主要貢獻(xiàn)為：1．對(duì)人CD34+造血干／祖細(xì)胞進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組學(xué)研究，鑒定了370個(gè)蛋白質(zhì)，這是迄今為止鑒定最多的CD34+細(xì)胞蛋白，并且鑒定了各種轉(zhuǎn)錄組研究沒能發(fā)現(xiàn)的133個(gè)CD34+細(xì)胞蛋白，發(fā)現(xiàn)了CD34+細(xì)胞具有可塑性的新的證據(jù)，證明了反義核酸未能完全阻止其相應(yīng)基因的表達(dá)，并提出一些蛋白的異質(zhì)性是由于翻譯后修飾造成；2．對(duì)日本血吸蟲進(jìn)行了大規(guī)模轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究，得到了大量的重要發(fā)現(xiàn)。獲得了約15000個(gè)基因種類，約占日本血吸蟲基因總數(shù)的90％，其中包括8400多個(gè)血吸蟲基因編碼蛋白質(zhì)，建立了目前世界上最大的日本血吸蟲功能基因組公共數(shù)據(jù)庫、基因克隆庫和菌種庫；鑒定了3260個(gè)不同生活周期的以及表皮的血吸蟲蛋白，并首次鑒定了卵殼蛋白，提供了眾多藥物靶點(diǎn)和潛在疫苗的選擇；在血吸蟲基因中發(fā)現(xiàn)了大量的遺傳多態(tài)性位點(diǎn)，并用序列測定和蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)驗(yàn)證；分析得到了血吸蟲保守的和特異的蛋白，為認(rèn)識(shí)血吸蟲生物學(xué)特征、開發(fā)抗血吸蟲藥物以及研制血吸蟲疫苗奠定了理論基礎(chǔ)；3．鑒定并分析了純化后... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：175 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

Ilses具有分化為多種血液細(xì)胞的潛力

往往難以溶解，造成蛋白損失。解決辦法是，少量多次加入，結(jié)合超聲和煮沸，反復(fù)提取，在使用了DNA酶和RNA酶作用以及丙酮沉淀不談，圖IB的膠點(diǎn)更分散、更清晰。我們的多

復(fù)旦大李博士格文消化時(shí)，我們也采用了獨(dú)特的方法。我們使用PCR儀做溫度反應(yīng)。一則PCR儀控溫準(zhǔn)確，二則有熱蓋，避免長時(shí)間酶解中的水分蒸發(fā)。而且使用的是PCR管，體積小，管底為尖狀，樣品集中，而且管壁光滑減少樣品吸附損失，尤其當(dāng)?shù)鞍啄z點(diǎn)很小的時(shí)候。Zintip去鹽。雖然理論上MALDI耐鹽，但ZIPtiP除鹽可以極大地改善譜圖質(zhì)量，因此該步不能省略。4.5難溶蛋白沉淀的處理丙酮沉淀后大部分蛋白可以溶解，少量蛋白難溶。在抽提組織蛋白時(shí)，也會(huì)遇到有部分蛋白難以溶解情況。為提高蛋白分析的覆蓋率，我們用含有高濃度SDS的蛋白電泳緩沖液，結(jié)合高溫和超聲波處理，盡量抽提沉淀中的難溶蛋白，再用一維SDS一隊(duì)GE分離，割條帶膠內(nèi)酶解后用在線反相色譜一質(zhì)譜分析(圖3)。


本文編號(hào)：3407786