本論文在楊芃原教授和韓澤廣研究員的指導下進行，主要工作在國家人類基因組南方研究中心完成。本博士論文的主要貢獻為：1．對人CD34+造血干／祖細胞進行了轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組學研究，鑒定了370個蛋白質(zhì)，這是迄今為止鑒定最多的CD34+細胞蛋白，并且鑒定了各種轉(zhuǎn)錄組研究沒能發(fā)現(xiàn)的133個CD34+細胞蛋白，發(fā)現(xiàn)了CD34+細胞具有可塑性的新的證據(jù)，證明了反義核酸未能完全阻止其相應(yīng)基因的表達，并提出一些蛋白的異質(zhì)性是由于翻譯后修飾造成；2．對日本血吸蟲進行了大規(guī)模轉(zhuǎn)錄組學和蛋白質(zhì)組學研究，得到了大量的重要發(fā)現(xiàn)。獲得了約15000個基因種類，約占日本血吸蟲基因總數(shù)的90％，其中包括8400多個血吸蟲基因編碼蛋白質(zhì)，建立了目前世界上最大的日本血吸蟲功能基因組公共數(shù)據(jù)庫、基因克隆庫和菌種庫；鑒定了3260個不同生活周期的以及表皮的血吸蟲蛋白，并首次鑒定了卵殼蛋白，提供了眾多藥物靶點和潛在疫苗的選擇；在血吸蟲基因中發(fā)現(xiàn)了大量的遺傳多態(tài)性位點，并用序列測定和蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)驗證；分析得到了血吸蟲保守的和特異的蛋白，為認識血吸蟲生物學特征、開發(fā)抗血吸蟲藥物以及研制血吸蟲疫苗奠定了理論基礎(chǔ)；3．鑒定并分析了純化后... 

【文章來源】：復(fù)旦大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：175 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

Ilses具有分化為多種血液細胞的潛力

往往難以溶解，造成蛋白損失。解決辦法是，少量多次加入，結(jié)合超聲和煮沸，反復(fù)提取，在使用了DNA酶和RNA酶作用以及丙酮沉淀不談，圖IB的膠點更分散、更清晰。我們的多

復(fù)旦大李博士格文消化時，我們也采用了獨特的方法。我們使用PCR儀做溫度反應(yīng)。一則PCR儀控溫準確，二則有熱蓋，避免長時間酶解中的水分蒸發(fā)。而且使用的是PCR管，體積小，管底為尖狀，樣品集中，而且管壁光滑減少樣品吸附損失，尤其當?shù)鞍啄z點很小的時候。Zintip去鹽。雖然理論上MALDI耐鹽，但ZIPtiP除鹽可以極大地改善譜圖質(zhì)量，因此該步不能省略。4.5難溶蛋白沉淀的處理丙酮沉淀后大部分蛋白可以溶解，少量蛋白難溶。在抽提組織蛋白時，也會遇到有部分蛋白難以溶解情況。為提高蛋白分析的覆蓋率，我們用含有高濃度SDS的蛋白電泳緩沖液，結(jié)合高溫和超聲波處理，盡量抽提沉淀中的難溶蛋白，再用一維SDS一隊GE分離，割條帶膠內(nèi)酶解后用在線反相色譜一質(zhì)譜分析(圖3)。


本文編號：3407786