腎綜合征出血熱（HFRS）是人類的一種急性傳染病，并廣泛分布于世界各地；其臨床特征為高熱、廣泛出血和急性腎功能衰竭。引起該病的病原體是布尼亞病毒科漢坦病毒屬中的某些病毒，其四種血清型的代表株分別為漢灘病毒（HTN）、漢城病毒（SEO）、普馬拉病毒（PUU）和希望山病毒（PH），相應的主要儲存宿主分別是黑線姬鼠、褐家鼠、歐洲棕背（鼠平）和田鼠；除希望山病毒外，HTN、SEO和PUU三型病毒又分別引起重型、中型和輕型的腎綜合征出血熱。除此之外，新近又有四種基因型別的漢坦病毒被發(fā)現(xiàn)：泰國病毒（Thai）、多布拉伐—貝爾格萊德病毒（DOB）、索托帕拉亞病毒（TPM）和美國的漢坦病毒肺綜合征病毒（HPS）。血清學研究表明在中國主要是由HTN和SEO兩型病毒引起腎綜合征出血熱；因此建立檢測漢坦病毒核酸的方法、研究漢坦病毒的基因分型和變異，對漢坦病毒的流行病學調(diào)查、實驗室診斷和發(fā)病機理的研究均具有重要意義。 由于漢坦病毒是分節(jié)段的單股負鏈RNA病毒，本文首先建立了 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

RT一PCR檢測l~10天Vero一E6感染細胞的結果

結果Hinol能將擴增產(chǎn)物切成兩條帶，Hael能將擴增產(chǎn)物切成3一4條帶，酶切后所得條帶大小與理論設計完全吻合。限制性酶切分析的電泳結果見圖2。4.2巢式PCR以PCR擴增產(chǎn)物為模板，BS、B6為引物，進行巢式PCR擴增，所得二次擴增產(chǎn)物的大小約4obop，與理論值完全一致，電泳結果見圖2。.43PCR產(chǎn)物的序列分析將漢坦病毒Ag株代替76一118株后，重復上述試驗，得到完全類似的實驗結果。將Ag的PCR產(chǎn)物純化后直接測序，并將Ag株M片段的序列輸入計算機后與漢坦病毒的代表株76一118M片段的序列「“〕進行比較，結果兩者的同源性為81.8%

上述結果除Lekay毒株外，均與血清分型結果相吻合，并與國內(nèi)梁米芳卿〕等采用單克隆抗體的分型結果一致。各毒株的基因分型結果見表3，I型和亞型病毒分型的電泳結果分別見圖1和圖2。123456M上行自左至右:1.下行自左至右:L圖lM56;血清A96;3Maaji;R36:4.Ag;5.Chen;6.76一11884一FLi;4.Hl;5.JR;6.A537型漢坦病毒的PCR分型電泳結果


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