本研究旨在構(gòu)建小鼠血管細(xì)胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,通過轉(zhuǎn)染建立穩(wěn)定高表達(dá)VCAM-1的間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSC）,并初步探討VCAM-1基因過表達(dá)對(duì)MSC免疫學(xué)特性的影響。以小鼠脾臟組織總RNA為模板,通過RT-PCR擴(kuò)增小鼠VCAM-1基因cDNA,應(yīng)用基因工程技術(shù)將擴(kuò)增的cDNA片段插入PMSCVmigr-1逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,構(gòu)建重組逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)質(zhì)粒PMSCVmigr-1-mVCAM-1,經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切分析及測序鑒定后,用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,收獲含有病毒顆粒的上清;用病毒上清感染間充質(zhì)干細(xì)胞系（C3H10T 1/2）并檢測其表達(dá)。采用3H-TdR摻入法測定高表達(dá)VCAM-1的MSC在淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用。結(jié)果表明:酶切和測序鑒定證實(shí),正確構(gòu)建了小鼠VCAM-1的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)質(zhì)粒。逆轉(zhuǎn)錄病毒上清感染MSC后流式細(xì)胞術(shù)檢測到目的基因VCAM-1在MSC表面高表達(dá)。高表達(dá)VCAM-1的MSC對(duì)刀豆素A誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞... 

【文章來源】：中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2014,22(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    材料
    主要儀器設(shè)備
    小鼠脾臟組織中總RNA的提取
    目的基因片段的體外擴(kuò)增
    重組質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
    細(xì)胞T293的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染包裝
    間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T1/2的病毒上清感染
    對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的檢測
    MSC滋養(yǎng)層的建立
    淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) (LTT)
    統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    RT-PCR擴(kuò)增的小鼠VCAM-1的鑒定
    重組逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒MIGR1-VCAM-1的構(gòu)建及鑒定
    逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒及重組逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒在包裝細(xì)胞T293中的轉(zhuǎn)染率
    VCAM-1在間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T 1/2細(xì)胞中穩(wěn)定高表達(dá)
    過表達(dá)VCAM-1的間充質(zhì)干細(xì)胞系C3H10T 1/2細(xì)胞抑制刀豆素A引起的T細(xì)胞增殖
討論



本文編號(hào)：3329333