目的原核表達、純化呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）表位重組蛋白F1-F/M2,并檢測其在小鼠體內(nèi)的免疫原性,為RSV亞單位疫苗的研制、疫苗所致免疫病理反應(yīng)機理的研究提供參考。方法利用定點突變技術(shù)對原核表達載體pGEX-6p-1進行改造,在其GST標簽前制造一個HindⅢ酶切位點;從RSV long株中擴增F1片段,從質(zhì)粒pET28a-G1-F/M2中擴增F/M2基因片段,并在克隆載體pUC19的輔助下,將F1-F/M2基因連接至改造后的pGEX-6p-1載體中,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pGEX-6p-1-F1-F/M2,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21（DE3）,IPTG誘導(dǎo)表達。表達的重組蛋白經(jīng)6×His-tag標簽蛋白純化試劑盒純化后,經(jīng)尿素濃度梯度透析復(fù)性,SDS-PAGE分析其純度,BCA法檢測其濃度,Western blot法分析其反應(yīng)原性。將純化的重組蛋白F1-F/M2經(jīng)鋁佐劑乳化后,經(jīng)腹腔免疫BALB/c小鼠,共3次,間隔10 d,末次免疫后10 d,采用空斑減少試驗檢測小鼠血清、肺組織勻漿和鼻腔沖洗液中抗RSV中和抗體水平;取小鼠脾臟,分離... 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2014,27(09)CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌毒株、質(zhì)粒及細胞
    1.2 實驗動物
    1.3 主要試劑
    1.4 表達載體p GEX-6p-1的改造
    1.5 F1-F/M2基因片段的擴增
    1.6 重組原核表達質(zhì)粒p GEX-6p-1-F1-F/M2的構(gòu)建
    1.7 目的基因的誘導(dǎo)表達
    1.8 重組蛋白的純化
    1.9 重組蛋白的Western blot分析
    1.1 0 重組蛋白F1-F/M2的免疫原性檢測
        1.1 0. 1 動物分組及免疫
        1.1 0. 2 體液免疫水平檢測
        1.1 0. 3 細胞免疫水平檢測
2 結(jié)果
    2.1 RSV F1和F/M2基因片段擴增產(chǎn)物的鑒定
    2.2 重組表達質(zhì)粒p GEX-6p-1-F1-F/M2的鑒定
    2.3 表達產(chǎn)物的鑒定
    2.4 純化產(chǎn)物的鑒定
        2.4.1 SDS-PAGE分析
        2.4.2 濃度
        2.4.3 Western blot分析
    2.5 重組蛋白F1-F/M2的免疫原性
        2.5.1 體液免疫水平
        2.5.2 細胞免疫水平
3 討論



本文編號：3302276