NF-κB-inducing kinase（NIK）作為MAP3K家族中的一員,在一些生理過程的形態(tài)發(fā)生中起控制作用,同時也是促炎信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的重要分子,在IKK/NF-κB、JNK、ERK、p38 MAPK通路以及AP-1的活化過程中扮演重要角色,并且可以調(diào)控介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的基因的表達(dá)。NIK在自身免疫及獲得性免疫反應(yīng)過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。NIK在B細(xì)胞NF-κB活化及JNK活化中不可或缺;同時,NIK在TCR介導(dǎo)NF-κB活化及MAPKs活化,以及T細(xì)胞成熟、增殖中發(fā)揮關(guān)鍵作用。NIK基因?qū)χ行粤＜?xì)胞,單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等髓樣細(xì)胞的影響還未見報道。本實驗以小鼠單核細(xì)胞（J774A.1）、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞（pMac）、小鼠骨髓衍生細(xì)胞（BMDM）為實驗對象,應(yīng)用NIK siRNA干擾抑制NIK表達(dá),western-blot檢測相關(guān)蛋白、ELISA檢測相關(guān)細(xì)胞因子,從而研究NIK基因在巨噬細(xì)胞中的調(diào)控作用。LPS刺激J774A.1細(xì)胞時,隨著刺激時間的增加,NIK活化呈現(xiàn)遞增趨勢,在40min時p-NIK表達(dá)最多（P<0.01）;LPS的濃度在10ng/ml-1000ng/ml時,... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
第二章 實驗材料與儀器
    2.1 細(xì)胞株
    2.2 動物
    2.3 試劑
    2.4 溶液配制
    2.5 儀器
第三章 實驗方法
    3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.1.1 J774A.1 細(xì)胞凍存
        3.1.2 J774A.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        3.1.3 J774A.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.1.4 pMac細(xì)胞提取
        3.1.5 BMDM細(xì)胞提取
    3.2 LPS刺激時間優(yōu)化
        3.2.1 細(xì)胞準(zhǔn)備
        3.2.2 LPS刺激
        3.2.3 蛋白提取
        3.2.4 蛋白免疫檢測
    3.3 LPS刺激濃度優(yōu)化
        3.3.1 細(xì)胞準(zhǔn)備
        3.3.2 LPS刺激
        3.3.3 蛋白提取
        3.3.4 蛋白免疫檢測
        3.3.5 統(tǒng)計分析
    3.4 NIK SIRNA干擾J774A.1 對NIK、MEKK3蛋白表達(dá)影響
        3.4.1 細(xì)胞準(zhǔn)備
        3.4.2 電穿孔轉(zhuǎn)染
        3.4.3 LPS刺激
        3.4.4 蛋白提取及western-blot檢測
    3.5 NIK SIRNA干擾對PMAC細(xì)胞因子IL-1Β、IL-6、TNFΑ 分泌影響
        3.5.1 細(xì)胞準(zhǔn)備
        3.5.2 電穿孔轉(zhuǎn)染
        3.5.3 LPS刺激
        3.5.4 培養(yǎng)液收集
        3.5.5 ELISA檢測細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNFα
        3.5.6 統(tǒng)計分析
    3.6 NIK SIRNA干擾BMDM細(xì)胞TNFΑ 分泌的影響
        3.6.1 細(xì)胞準(zhǔn)備
        3.6.2 電穿孔轉(zhuǎn)染
        3.6.3 LPS刺激
        3.6.4 培養(yǎng)液收集
        3.6.5 ELISA檢測細(xì)胞因子TNFα
        3.6.6 統(tǒng)計分析
第四章 結(jié)果與討論
    4.1 J774A.1 細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果
    4.2 LPS刺激時間優(yōu)化結(jié)果
    4.3 LPS刺激濃度優(yōu)化結(jié)果
    4.4 NIK SIRNA干擾對NIK、MEKK3蛋白表達(dá)影響
    4.5 NIK SIRNA干擾對PMAC細(xì)胞因子IL-1Β、IL-6、TNFΑ 分泌影響
    4.6 NIK SIRNA干擾BMDM細(xì)胞TNFΑ 分泌的影響
    4.7 討論
    4.8 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]巨噬細(xì)胞的分類及其調(diào)節(jié)性功能的差異[J]. 李丹,任亞娜,范華驊.  生命科學(xué). 2011(03)
[2]靶向Tak1基因的siRNA干擾對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)[J]. 王欽富,李坤,李志,徐娜,董敏,韓慧.  中國醫(yī)藥生物技術(shù). 2011(01)



本文編號：3296206