目的:研究orexin-A對脊髓腹角神經(jīng)元基本電生理參數(shù)及煙堿型乙酰膽堿受體（nAChR）的作用。方法:使用7～12 d的新生SD大鼠。麻醉后,將含有腰骶膨大的脊髓分離并切片。用木瓜蛋白酶(papain,0.18 g/30 mL人工腦脊液消化切片并孵育40 min。顯微鏡下選取腹角,使用拋光的巴斯德吸管進行神經(jīng)元的急性機械分離。對貼壁的健康神經(jīng)元進行穿孔膜片鉗記錄。結(jié)果:①急性分離的脊髓腹角神經(jīng)元狀態(tài)良好,具有形狀多樣的胞體和完整的突起;②9個急性分離的脊髓腹角神經(jīng)元有自發(fā)動作電位;③持續(xù)灌流orexin-A（OXA） 2 min后,在5例細(xì)胞記錄到4個脊髓腹角神經(jīng)元的自發(fā)動作電位放電頻率增加了（63.64±5.25）%,幅度等參數(shù)無明顯變化;④在15個神經(jīng)元,有12例細(xì)胞給予0.3 mmol/L尼古丁誘導(dǎo)出內(nèi)向電流,幅度為（142.97±75.02）pA,用100 nmol/L OXA進行2 min的預(yù)處理,可顯著抑制電流幅度至（69.07±61.07）pA（P<0.001）,抑制率為（54.75±22.62）%;⑤在9個神經(jīng)元中有7例細(xì)胞給予尼古丁誘導(dǎo)的電流幅度為（129.3... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2019,38(03)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

急性分離的脊髓腹角神經(jīng)元的自發(fā)動作電位A:單個神經(jīng)元連續(xù)放電1s，放電頻率為12Hz

A:1min內(nèi)神經(jīng)元的自發(fā)放電;B:Orexin-A灌流2min后，同一神經(jīng)元的自發(fā)放電;C:用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外液沖洗2min后同一神經(jīng)元的自發(fā)放電。圖3Orexin-A對脊髓腹角神經(jīng)元自發(fā)動作電位的影響表1新生大鼠脊髓腹角神經(jīng)元在orexin-A灌流前后的電生理參數(shù)比較Orexin-A灌流前Orexin-A灌流后配對tP動作電位幅度/mV63．90±23．3372．00±12．510．9610．407放電頻率/Hz5．75±2．4916．25±7．953．3640．044閾電位/mV－48．77±12．08－51．54±5．740．4000．716超射/mV8．08±5．549．35±5．693．0040．057鋒電位幅度/mV53．26±20．4961．07±10．400．7060．531半幅時程/ms2．62±0．972．94±0．741．3850．260最大上升斜率/(mV/ms)42．58±30．3439．36±25．810．6740．548上升時間/ms0．35±0．260．24±0．090．6490．563最大下降斜率/(mV/ms)－24．33±22．48－17．80±14．021．2050．314下降時間/ms0．58±0．230．94±0．591．4780．2362．4Orexin-A對脊髓腹角神經(jīng)元尼古丁電流的作用在記錄的15個神經(jīng)元中的12例細(xì)胞，首先應(yīng)用0．3mmol/L尼古丁在脊髓腹角神經(jīng)元上誘發(fā)的電流幅度為(142．97±75．02)pA;再給予100nmol/Lorexin-A預(yù)處理2min后，可顯著抑制尼古丁電流至(69．07±61．07)pA(P＜0．001)，抑制率為(54．75±22．62)%;使用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外液灌流沖洗2min后，再次記錄尼古丁電流幅度為(108．59±62．95)pA，與給予orexin-A后記錄的尼古丁電流相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．01)。各組間尼古丁電流幅度均值差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=3．598，P=0．039)，結(jié)果見圖4。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]急性分離的脊髓腹角神經(jīng)元膜片鉗記錄技術(shù)[J]. 高凌云,張環(huán)環(huán),查盈盈,鄭超,汪萌芽.  皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2017(06)
[2]Orexin:覺醒通路中一種重要的下丘腦神經(jīng)肽[J]. 宋承輝,胡志安.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2003(13)



本文編號：3286204