【目的】圣路易斯腦炎病毒（St. Louis encephalitis virus,SLEV）屬于黃病毒科,是一種單股正鏈RNA病毒。黃病毒編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白NS3在病毒復(fù)制以及多聚蛋白加工過程中起著重要作用,NS2B是其發(fā)揮作用的重要輔助因子。因此,NS2B-NS3蛋白酶復(fù)合物是抗病毒藥物的重要靶標(biāo)。本研究旨在構(gòu)建SLEV NS2B-NS3蛋白酶的原核表達系統(tǒng)并建立其抑制劑的高通量篩選方法,從而發(fā)現(xiàn)其小分子抑制劑。【方法】通過PCR擴增SLEVNS2B-NS3蛋白的編碼區(qū),構(gòu)建原核表達質(zhì)粒;在大腸桿菌BL21（DE3）中,經(jīng)異丙基硫代半乳糖苷（Isopropyl β-D-thiogalactoside）誘導(dǎo)得到可溶性的NS2B-NS3蛋白,并用鎳親和層析方法進行純化;基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（Fluorescence resonance energy transfer）技術(shù)檢測NS2B-NS3蛋白酶活性,建立其抑制劑的高通量篩選平臺。【結(jié)果】SLEV NS2B-NS3蛋白酶純化程度高達95%以上,基于酶活測定的抑制劑篩選平臺準(zhǔn)確可行。對700多個上市藥物進行篩選后,發(fā)現(xiàn)原花青素對SLEVN... 

【文章來源】：微生物學(xué)報. 2019,59(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實驗材料
    1.2 SLEV NS2B-NS3蛋白酶重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
    1.3 SLEV NS2B-NS3蛋白酶的表達與純化
    1.4 SLEV NS2B-NS3蛋白酶的絲氨酸蛋白酶活性檢測
    1.5 SLEV NS2B-NS3的絲氨酸蛋白酶抑制劑篩選平臺的建立
2 結(jié)果和分析
    2.1 重組質(zhì)粒SLEV NS2B-NS3的構(gòu)建及鑒定
    2.2 SLEV NS2B-NS3蛋白酶的表達與純化
    2.3 SLEV NS2B-NS3的絲氨酸蛋白酶活性的測定
    2.4 SLEV NS2B-NS3蛋白酶抑制劑的篩選
3 討論



本文編號：3284681