人巨細(xì)胞病毒（Human Cytomegalorvirus HCMV）PP71基因是HCMV基質(zhì)蛋白基因，能夠增加病毒繁殖，加快病毒在細(xì)胞間傳遞；該P(yáng)P71蛋白單獨(dú)存在時(shí)，是一種較強(qiáng)的抗原蛋白，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，有助于清除病毒。為了進(jìn)一步研究PP71基因在大腸桿菌中的表達(dá)及純化蛋白在病毒繁殖中的作用，為該病毒致病性、診斷及治療研究提供科學(xué)依據(jù)。本論文研究了PP71基因的克隆、測序、在原核中的表達(dá)及純化蛋白對病毒繁殖的作用。實(shí)驗(yàn)采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase chain reaction PCR）方法，擴(kuò)增HCMV-PP71基因，并連接到表達(dá)載體pET28a上，構(gòu)建了pET28a-PP71重組表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化到表達(dá)宿主菌BL21（DE3）中進(jìn)行表達(dá)，對PP71基因DNA片段進(jìn)行測序，與基因庫中的標(biāo)準(zhǔn)序列比較，同源性為99.69％，證明該基因是一保守基因。同時(shí)利用異丙基－β－D－硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)，高效地表達(dá)出目的蛋白，分子量為40KD，與理論分子量一致，占菌體總蛋白的39％左右；經(jīng)親和層析純化，純度達(dá)到總目的蛋白的91％。研究不同OD₆₀₀值、溫... 

【文章來源】：中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院武漢病毒研究所)湖北省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
一、 中文摘要
二、 英文摘要
三、 前言
四、 材料
五、 實(shí)驗(yàn)方法
六、 結(jié)果與分析
七、 討論
八、 參考文獻(xiàn)
九、 已公開發(fā)表的論文
十、 致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]一種新的PCR產(chǎn)物回收方法[J]. 張?jiān)Ｆ?陳立群,李天憲.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2001(01)
[2]3種皰疹科病毒DNA提取方法的建立[J]. 張?jiān)Ｆ?李天憲,張俊杰,陶生策.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2000(02)
[3]巨細(xì)胞病毒的分子生物學(xué)研究現(xiàn)狀與優(yōu)生優(yōu)育[J]. 陳悅.  中國優(yōu)生與遺傳雜志. 2000(01)
[4]巨細(xì)胞病毒感染與免疫[J]. 杜麗華,明景裕.  云南醫(yī)藥. 1999(06)
[5]人巨細(xì)胞病毒轉(zhuǎn)化作用的研究進(jìn)展[J]. 劉朝奇.  國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊). 1997(05)
[6]巨細(xì)胞病毒活動(dòng)性感染的分子生物學(xué)特點(diǎn)[J]. 史金陽.  國外醫(yī)學(xué)(兒科學(xué)分冊). 1997(05)
[7]在大腸桿菌表達(dá)體系中以包涵體形式存在的真核生物蛋白質(zhì)的分離、復(fù)性和二硫鍵的形成[J]. 陳來同,茹炳根.  中國生化藥物雜志. 1997(01)
[8]巨細(xì)胞病毒感染的診斷、治療和預(yù)防[J]. 楊紹基.  國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊). 1996(09)
[9]以包涵體形式存在的重組蛋白的純化和體外折疊[J]. 凌明圣,許祥裕,丁樹標(biāo).  中國生化藥物雜志. 1995(03)
[10]巨細(xì)胞病毒與腫瘤[J]. 張笑人,魏海明.  國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊). 1994(06)



本文編號：3276060