酰基輔酶A：膽固醇�；D(zhuǎn)移酶（ACAT）是細胞內(nèi)唯一催化游離膽固醇和脂肪酸合成膽固醇酯的酶，在膽固醇及酯類代謝平衡中起著非常重要的作用。廣泛存在于細胞中的ACAT-1，與病理性的動脈粥樣硬化（AS）病變關(guān)系密切。據(jù)文獻報道，動脈粥樣硬化病變形成的脂質(zhì)斑塊中含有大量的腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等細胞因子，推測其可能促進單核／巨噬細胞內(nèi)膽固醇酯積累而形成泡沫細胞，即動脈粥樣硬化早期病變。相關(guān)研究已經(jīng)觀察到：TNF-α能顯著增強人單核細胞株THP-1中ACAT-1基因的表達及其P1啟動子的活性，并且人ACAT-1基因P1啟動子的核心序列位于EXon 1上游-125～-79位47 bp的DNA片段。木課題的工作是：（1） 建立DEAE-Dextran介導(dǎo)的THP-1細胞轉(zhuǎn)染外源熒光素酶報告基因質(zhì)粒表達測活分析系統(tǒng)，利用pGFP質(zhì)粒作為外源DNA檢測其轉(zhuǎn)染效率，并優(yōu)化條件。（2） 通過PT-PCR方法檢測THP-1受TNF-α刺激后其內(nèi)源人ACAT-1基因表達水平的變化：利用NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑TPCK、MG132和可表達突變型IκB質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染實驗，觀察到TNF-α增強P1啟動子活... 

【文章來源】：華東師范大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

AcA’r一l基因的組織結(jié)構(gòu)

八B圖1.2.2THp一l細胞瞬時表達綠色熒光蛋自照片(轉(zhuǎn)染質(zhì)牢儀為p(;Fp，條介I為D「AE一dexrra:1150pglml:孵育時陌J20min，細胞生長24小H、11丫J細胞照片、I:‘J·事見{!，斷卜).冬!l.I.ZA一今衡光顯微鏡!!收片·:圖:1.21玉.川l兮不臺盼收染色15

++(50飯)U/一nl)25卜:M)F-a對單核細胞株THP一l中人ACAT.l基因lx1PI啟動子轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物及內(nèi)標基因GAPDHrk軟于I:對DNA條帶進行掃描定斌，t作柱狀圖


本文編號：3270505